中英文说明丨艾美捷植物染色质免疫沉淀(ChIP)试剂盒

The interaction between protein and DNA plays a key role in cell functions, such as signal transduction, gene transcription, chromosome separation, DNA replication and recombination, and epigenetic silencing. In plants, the interaction between DNA binding proteins and homologous promoter sequences is the main determinant of establishing gene spatial and temporal expression patterns that affect homeostasis, development and adaptation. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) provides a useful tool for identifying the direct genome-wide association between specific regulatory proteins and their target genes. Unlike other methods such as EMASA, DNA microarray, and reporter gene analysis that analyze direct interactions between proteins and DNA in vitro, ChIP can detect specific protein binding to specific sequences of genes in living cells.

Principles and Procedures

Amyjet Plant chromatin immunoprecipitation (ChIP) Kit # P-2014-24 includes all reagents required for successful chromatin immunoprecipitation from plant cells. Specifically, the kit includes ChIP grade dimethylhistone H3-K9 antibodies and negative control normal mouse IgG. The chromatin in the cells was extracted, cut and added into the micropores fixed with antibodies. DNA is released from the protein DNA complex captured by antibodies, and is reversed and purified through a specially designed F-Spin column. The washed DNA can be used for various downstream applications.

蛋白质与DNA的相互作用对细胞功能起着关键作用，如信号转导、基因转录、染色体分离、DNA复制和重组以及表观遗传沉默。在植物中，DNA结合蛋白和同源启动子序列之间的相互作用是建立影响体内平衡、发育和适应的基因空间和时间表达模式的主要决定因素。染色质免疫沉淀（ChIP）为鉴定特定调节蛋白与其靶基因之间的直接全基因组关联提供了一种有利的工具。与EMASA、DNA微阵列和报告基因分析等在体外分析蛋白质和DNA之间直接相互作用的其他方法不同，ChIP可以检测特定蛋白质与活细胞中基因的特定序列结合。

原则与程序

艾美捷植物染色质免疫沉淀(ChIP)试剂盒#P-2014-24包括从植物细胞成功进行染色质免疫沉淀所需的所有试剂。特别地，该试剂盒包括ChIP级二甲基组蛋白H3-K9抗体和阴性对照正常小鼠IgG。将细胞中的染色质提取、剪切并加入用抗体固定的微孔中。DNA从抗体捕获的蛋白质-DNA复合物中释放出来，通过专门设计的F-Spin柱进行逆转和纯化。洗脱的DNA可用于各种下游应用。

植物染色质免疫沉淀(ChIP)试剂盒#P-2014-24：

英文名称：EpiQuik Plant Chromatin Immunoprecipitation(ChIP) Kit

中文名称：植物染色质免疫沉淀（ChIP）试剂盒

cat#：P-2014-24/P-2014-48

规格：24Reactions/48Reactions

植物染色质免疫沉淀(ChIP)试剂盒#P-2014-24组织裂解和DNA剪切：

1.通过加入1.25ml的2M甘-氨-酸溶液（最终浓度0.125M）来骤冷交联继续真空渗透另外5分钟。

2.去除甲醛，用20毫升去离子水冲洗纸巾两次。在冲洗，尽可能多地去除水分（在这个阶段，交联组织可以冷冻在液氮中，储存在–80°C，或直接用于染色质提取）。

3.用蒸馏水以1:5的比例稀释CP3C（1X CP3C）。每10 ml 1X中加入3.5µl BME CP3C中。将纸巾在液氮中研磨成细粉末。将粉末加入20毫升冷1X中 CP3C在一个50毫升的锥形管中，然后涡旋，放在冰上。

4.通过两层Miracloth将溶液过滤到50毫升的试管中，并离心过滤后的溶液在4000转/分（1900X克）下进行20分钟。

5.在每1ml CP3D中加入1µl BME。取出上清液，将沉淀重新悬浮在1ml包含BME的CP3D。将重新悬浮的颗粒转移到1.5毫升的小瓶中，并在12000下离心在4°C下以每分钟转数旋转10分钟，以沉淀细胞核（在此阶段应看到白色沉淀）。

6.在每1ml CP3E中加入1µl BME。取出上清液，将沉淀重新悬浮在300µl含有BME的CP3E。

7.将300µl含有BME的CP3E加入一个新的1.5 ml小瓶中。将重新悬浮的颗粒分层步骤6在这个300µl的垫子上，在4°C下以14000 rpm离心45分钟。

8.取出上清液，将染色质沉淀重新悬浮在500µl含有蛋白酶的CP3F中抑制剂鸡尾酒（PIC）（例如：每1ml CP3F中加入10µl PIC）。通过超声处理剪切DNA。例如，在冰上超声处理染色质溶液五次，每次15秒，占空比为40%。将样品放在冰上1分钟超声处理。（交联DNA剪切的条件可以基于细胞和声波仪设备。如果需要，去除5µl超声处理的细胞裂解物以获得琼脂糖凝胶分析剪切DNA的长度应在200-1000bp之间。）

9. 通过在4°C下以14000rpm离心10分钟来沉淀颗粒细胞碎片。