大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞；RBL-1使用说明书

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称  大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞；RBL-1使用说明书
形态特性   淋巴母细胞样
生长特性  悬浮生长
特征特性   该细胞表现出多种嗜碱性粒细胞的分化特征：释放组胺，表达IgE的Fc受体。 
培养条件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
传代方法   维持细胞浓度在0.1～1×105 cells/ml；2～3天换液1次。
传代情况  C3
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  培养法（-）
STR   -
同工酶  
染色体  
使用权限  A类

复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
D-*    D-Proline;(R)-Pyrrolidine-2-carboxylic acid;(R)-(+)-Proline;D-Pro    344-25-2
D-果糖-1，6-二磷酸三钠（2-8℃）    D-Fructose-1,6-diphosphate trisodium salt octahydrate    81028-91-3
D-果糖-6-磷酸二钠（-20℃）    D-FRUCTOSE 6-PHOSPHATE DISODIUM SALT    26177-86-6
D(-)核糖（+4℃）    D-Ribose    50-69-1
D-环戊基*    D-Cyclopentylglycine    2521-86-0
D-甲硫氨基酸    D-Methionine    348-67-4
D-来苏糖    D-LYXOSE    1114-34-7
D-赖氨酸盐酸盐    D-Lysine hydrochloride    7274-88-6
D-木酮糖.(2-8℃) 95％    D-XYLULOSE    551-84-8人克拉拉细胞蛋白(CC16)免疫试剂盒    Human CC16 ELISA Kit
人可溶性转铁蛋白受体(sTfR)免疫试剂盒    Human soluble transferrin receptor,sTfR ELISA Kit
人可溶性肿瘤坏死因受体2(sTNF-R2)免疫试剂盒    Human sTNF-R2 ELISA Kit
人可溶性血小板内皮细胞粘附分1(sPECAM-1/sCD31)免疫试剂盒    Human soluble plaet endothelial cell adhesion molecule 1,sPECAM-1 ELISA Kit
人可溶性血纤蛋白单体复合物(SFMC)免疫试剂盒    Human soluble fibrin monomer complex,SFMC ELISA Kit
人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)免疫试剂盒    Human sEPCR ELISA Kit
人可溶性胸苷激酶1(TK1)免疫试剂盒    Human Thymidine Kinase 1,Soluble(TK1)ELISA Kit
人可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)免疫试剂盒    Human soluble lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1(sLOX-1)ELISA Kit
人可溶性间皮素相关肽(SMRP)免疫试剂盒    Human Soluble Mesothelin Related Peptide,SMRP ELISA Kit