EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY1036使用说明书一

细胞名称  EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY1036使用说明书一
形态特性   淋巴母细胞样
生长特性  悬浮生长
特征特性   该细胞系来源于一无精症男性的外周血。2010年由中科院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。 
培养条件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
传代方法   1:2传代；5-6天一次
传代情况  P2
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  荧光法（-）
STR   -
同工酶  
染色体  
使用权限  A类

复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
IRAK2    英文名称：    白介素-1受体相关激酶2抗体    ?0.2ml
Phospho-Insulin Receptor Beta (Tyr1355)    英文名称：    磷酸化胰岛素受体β抗体    ?0.1ml
Phospho-Insulin Receptor Beta (Tyr1361)    英文名称：    磷酸化胰岛素受体β抗体    ?0.1ml
Integrin alpha E2    英文名称：    整合素alpha E2 抗体    ?0.1ml
Integrin Alpha V    英文名称：    整合素αV抗体    ?0.2ml
IGBP1    英文名称：    免疫球蛋白结合蛋白1抗体    ?0.2ml
phospho-IGF1R (Tyr1346)    英文名称：    胰岛素样生长因子1受体抗体    ?0.1ml
IGFBPL1    英文名称：    胰岛素样生长因子结合蛋白样1抗体    ?0.2ml
IGHD    英文名称：    免疫球蛋白D重链保守区抗体    ?0.2ml
IGLK    英文名称：    IV型己糖激酶抗体    ?0.2ml
IGLL1    英文名称：    免疫球蛋白lambda样肽1抗体    ?0.2mlDHEA(Mouse Dehydroepiandrosterone) ELISA Kit  小鼠脱氢表雄酮    Multi-class antibodies    规格：     48T
HMGB-1(Mouse High mobility group protein B1) ELISA Kit  小鼠高迁移率族蛋白B1    Multi-class antibodies    规格：     48T
EL(Mouse Endothelial lipase) ELISA Kit  小鼠内皮脂肪酶    Multi-class antibodies    规格：     48T
CA(Mouse carbonic anhydrase) ELISA Kit  小鼠碳酸酐酶    Multi-class antibodies    规格：     48T
CGRP(Mouse calcitonin gene related peptide) ELISA Kit  小鼠降钙素基因相关肽    Multi-class antibodies    规格：     48T
MTL(Mouse Motilin) ELISA Kit  小鼠胃动素    Multi-class antibodies    规格：     48T
SS(Mouse Somatostatin) ELISA Kit  小鼠*    Multi-class antibodies    规格：     48T
Fbg(Mouse Fibrinogen) ELISA Kit  小鼠血纤蛋白原    Multi-class antibodies    规格：     48T
PAF(Mouse plaet activating factor) ELISA Kit  小鼠血小板活化因子    Multi-class antibodies    规格：     48T
sm Actinin- Alpha(Mouse skeletal muscle Actinin- Alpha) ELISA Kit  小鼠横纹肌辅肌动蛋白α    Multi-class antibodies    规格：     48T
MYS(Mouse Myosin) ELISA Kit  小鼠肌球蛋白    Multi-class antibodies    规格：     48T
MHC I /H-2 I (Mouse major histocompatibility complex I ) ELISA Kit  小鼠主要组织相容复合体Ⅰ类    Multi-class antibodies    规格：     48T
GATA4Mouse GATA binding protein 4) ELISA Kit  小鼠GATA结合蛋白4    Multi-class antibodies    规格：     48T
IP-10/CXCL10(Mouse interferon-inducible protein 10) ELISA Kit  小鼠干扰素诱导蛋白10    Multi-class antibodies    规格：     48T
ENA-78/CXCL5(Mouse Epithelial neutrophil activating peptide 78) ELISA Kit  小鼠上皮中粒细胞活化肽78    Multi-class antibodies    规格：     48T