人永生化淋巴细胞；CNLMG-B5537LC培养

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称  人永生化淋巴细胞；CNLMG-B5537LC培养
形态特性   淋巴母细胞样
生长特性  悬浮生长
特征特性   该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。 
培养条件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
传代方法   1:3传代，3-4天传1次
传代情况  C10
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  阴性
STR  
同工酶  
染色体  
使用权限  未定

复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
dsDNA ELISA Kit   大鼠抗双链DNA抗体/天然DNA抗体    Multi-class antibodies    规格：     48T
ALP ELISA Kit  大鼠碱磷酸酶    Multi-class antibodies    规格：     48T
ADAMTS13/vWF-cp ELISA Kit  大鼠血管血友病因子裂解蛋白酶    Multi-class antibodies    规格：     48T
ANG-4 ELISA Kit  大鼠血管生成素4    Multi-class antibodies    规格：     48T
LBP ELISA Kit   大鼠脂多糖结合蛋白    Multi-class antibodies    规格：     48T
ADH ELISA Kit  大鼠乙醇脱氢酶    Multi-class antibodies    规格：     48T
ALDH ELISA Kit  大鼠乙醛脱氢酶    Multi-class antibodies    规格：     48T
sCD14 ELISA Kit  大鼠可溶CD14    Multi-class antibodies    规格：     48T
MIS/AMH)ELISA Kit  大鼠缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素    Multi-class antibodies    规格：     48T
androgen ElISA Kit  大鼠雄激素    Multi-class antibodies    规格：     48T
TLR4 ELISA Kit  大鼠Toll样受体4    Multi-class antibodies    规格：     48TPhospho-HER4 (Tyr1162)    英文名称：    磷酸化HER4抗体    ?0.1ml
Phospho-HER4 (Tyr1188)    英文名称：    磷酸化HER4抗体    ?0.1ml
HSD17B3    英文名称：    羟类固醇脱氢酶17β3抗体    ?0.2ml
HSD11B1    英文名称：    羟基类固醇脱氢酶11β1抗体    ?0.1ml
HSD3B1    英文名称：    滋养层细胞抗原3β-HSD抗体    ?0.1ml
Acetyl-Histone H4(K8)    英文名称：    乙酰化组蛋白H4抗体    ?0.1ml
phospho-HMGN1(Ser20+Ser24)    英文名称：    磷酸化高迁移率核小体结合蛋白1    ?0.1ml
HE4    英文名称：    附睾分泌蛋白4抗体    ?0.2ml
Histone H3 (Tri Methyl K4)    英文名称：    *基化组蛋白H3抗体    ?0.1ml
HMGCR    英文名称：    三羟基*基*还原酶抗体    ?0.1ml
Heparan Sulfate Proteoglycan 2    英文名称：    硫酸乙酰肝素蛋白多糖2    ?0.1ml