人胚肾上皮细胞；GC-293T培养

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称  人胚肾上皮细胞；GC-293T培养
形态特性   上皮样
生长特性  贴壁生长
特征特性   该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。 
培养条件    10%FBS
传代方法   无
传代情况  1:3传代，3-4天传1次
冻存条件   C5
支原体检测  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
STR   阴性
同工酶  
染色体   未做

复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
TAFI ELISA Kit  大鼠纤溶抑制因子/*激活的纤溶抑制物    Multi-class antibodies    规格：     48T
GP- II b III a/CD41+CD61 ELISA Kit  大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa    Multi-class antibodies    规格：     48T
TSP-1 ELISA Kit  大鼠血小板反应蛋白/*敏感蛋白1    Multi-class antibodies    规格：     48T
ON ELISA Kit  大鼠骨粘连蛋白    Multi-class antibodies    规格：     48T
FFA ELISA Kit  大鼠游离脂肪酸    Multi-class antibodies    规格：     48T
FA ELISA Kit  大鼠*    Multi-class antibodies    规格：     48T
histon-H2b ELISA Kit  大鼠组蛋白H2b    Multi-class antibodies    规格：     48T
NT-proBNP ELISA KIT  大鼠N端前脑钠素    Multi-class antibodies    规格：     48T
GR ELISA Kit  大鼠糖皮质类固醇受体    Multi-class antibodies    规格：     48T
LHRH ELISA Kit  大鼠黄体生成素释放激素    Multi-class antibodies    规格：     48T
8-iso-PG ELISA Kit  大鼠8异前列腺素    Multi-class antibodies    规格：     48T
IFI16/p16 ELISA Kit  大鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16    Multi-class antibodies    规格：     48T
SDF-1a/CXCL12 ELISA Kit   大鼠基质细胞衍生因子1a    Multi-class antibodies    规格：     48T
GMP-140 ELISA Kit   大鼠血浆α颗粒膜蛋白    Multi-class antibodies    规格：     48T
MPO ELISA Kit  大鼠髓过氧化物酶    Multi-class antibodies    规格：     48Tphospho-HMGCR(Ser872)    英文名称：    磷酸化三羟基*基*还原酶抗体    ?0.1ml
HSD3a    英文名称：    羟基类固醇脱氢酶3α抗体    ?0.2ml
HLX1    英文名称：    同源异型盒基因HLX1蛋白抗体    ?0.2ml
HMGCS1    英文名称：    三羟基*基*合成酶1    ?0.2ml
HSF1    英文名称：    热休克因子1抗体    ?0.1ml
phospho-HSF1(Ser326)    英文名称：    磷酸化热休克因子1抗体    ?0.1ml
Hsc70    英文名称：    热休克蛋白71抗体    ?0.1ml
hHBrk1    英文名称：    微丝相关蛋白hHBrk1抗体    ?0.1ml
HPCL2    英文名称：    植烷酰*羟化酶2抗体    ?0.2ml
H9N1 Neuraminidase    英文名称：    A型流感病毒H9N1神经氨酸酶型抗体    ?0.2ml
H9N1 Hemagglutinin    英文名称：    A型流感病毒H9N1血凝素型抗体    ?1ml
HPV33 E7    英文名称：    人类状瘤病毒33抗体    ?0.2ml
H1N1 Matrix Protein 1    英文名称：    A型病毒H1N1蛋白抗体    ?0.1ml