一步式 RT-PCR Mix 1mL说明书?合成建文库用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
一步式 RT-PCR Mix 1mL说明书?按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。
产品介绍：
?产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
C18H14N2Na2O8S2=496.42
〖级别〗：AR
〖含量〗：≥85.0%
λmax：497～501nm(0.02 mol/L醋酸铵溶液)
干燥减量、〖氯化物〗及〖硫酸盐〗总量：≤0.2 %
水中不溶物：≤0.2 %
〖砷〗：≤0.0001%
〖铅〗：≤0.001%
〖重金属〗(以Pb计)：≤0.002%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：橙色或红色至紫红色粉末。
〖用途〗：本品仅供科研，不得用于其它〖用途〗
菌落 PCR 试剂盒 2.0 内毒素清除亲和介质
微量核酸沉淀剂 Protein G 琼脂糖
克必隆常态转化液 DEAE 交换介质
细菌 RNAout CM 交换介质
细菌 RNAout Q 交换介质
克必隆 B 载体 SP 交换介质
RNase-free CTAB 溶液 ,20% 苯基介质
非酶 RNA 清除剂 1.0 丁基介质
RNA DEPC ( 焦碳酸二乙酯 ) 丁基硫介质
Taq DNA 聚合酶 天净沙甲基化 PCR 2.0 试剂盒
Taq DNA 聚合酶 Phusion DNA 聚合酶
Pfu DNA 聚合酶 E.coli DNA 聚合酶 Ι
dNTP 溶液，2.5mM 磁珠动物 DNAout
细菌蛋白酶抑
