WISH细胞 人羊膜细胞(WISH细胞株)
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小鼠神经母细胞瘤细胞与大鼠胶质瘤细胞之融合细胞NG108-15细胞
人舌鳞癌Tca8113-P60细胞、人舌鳞癌Tca8113-P160细胞
人乳癌BC-020细胞、人乳癌BC-021细胞
通派生物细胞库提供(卵清蛋白诱发的哮喘模型):
过敏性哮喘是2型T辅助细胞(Th2)驱动的炎性疾病。Th2细胞因子的重要性已在众多小鼠研究中得到验证。具体来说,Th2淋巴细胞可以产生各种促炎性细胞因子,这些因子在过敏性哮喘的发展中具有重要作用,包括白介素(IL)-4,IL-5和IL-13。此外,它们还可以诱导过敏原特异性免疫球蛋白(Ig)E,趋化因子和嗜酸性粒细胞的分泌以及粘液的产生。
OVA是蛋清中的主要蛋白质,它不是机体固有的过敏源,因此需要在佐剂(通常为氢氧化_铝)的联合下进行全身注射,以诱导小鼠Th2致敏。通常,在造模时向小鼠腹膜内注射与铝(铝)复合的卵清蛋白(OVA)。随后,致敏的小鼠受到OVA的攻击,导致小鼠出现括嗜酸性粒细胞炎症,Th2细胞因子产生,血清IgE升高和气道反应过度等哮喘特征。
血清生长测试步骤:
1): 以a-MEM with 10 % FBS (已测试过) 培养MDCK 细胞于T75 flask 至80% confluency;
2):以trypsin-EDTA 处理细胞,离心后,加入适量不加血清之a-MEM 制成细胞悬浮液,并测细胞浓度。以不加血清之a-MEM 稀释细胞浓度为1×102活细胞数/ ml。
3):将1 ml 细胞悬浮液接种入6-well plate 中,并另加入1 ml 含不同浓度的血清(20 % , 10 % , 4 % , 2 % , 1 % , 0.4 %) 的a-MEM,使血清最终浓度为10% , 5 % , 2 % , 1 % , 0.5 % , 0.2 %。用已测试过之血清同时进行对照组试验。
4):37℃,5% CO2 培养箱培养5-7天,期间不需更换培养基,待细胞群落大到可以肉眼观察,而群落间不互相接触即可。
5):去除培养基,加入1 ml Carnoy’s 固定液(甲醇:冰醋酸﹦ 3:1),室温下静置10 min。
6):去除固定液,水洗二次,加入1 ml 10 % Giemsa solution,,室温下静置染色2-3 min。
7):去除染液,水洗二次,以肉眼计数群落数;
8):计算SPE ( Serum Plating Efficiency ):SPE = ( no. of colonies / well ) / 100 x 100 %
9):计算RPE(Relative Plating Efficiency):SPE = [ total colonies of six well (test) / Total colonies of six well (control) ] x100 %
更多细胞操作方法、注意事项可咨询通派细胞库管理员;
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