荧光PCR法：NiV新型尼帕病毒核酸试剂盒

荧光PCR法：NiV新型尼帕病毒核酸试剂盒

广州健仑生物科技有限公司

‌名称‌：尼帕病毒PCR检测试剂（50人份/盒）

预期用途

尼帕病毒PCR检测试剂盒定性检测样本（如血液、咽 拭子）或培养物中的尼帕病毒核酸，结果仅作研究参考，非诊断依据。

尼帕病毒是一种高致死率的人畜共患病毒，主要通过接触受感染的动物（如果蝠、猪）或其体液传播，可引发严重脑炎和呼吸道疾病，致死率高达40%-75%。它被世界卫生组织列为重点防范的潜在大流行威胁病毒之一。

‌病毒特点‌

动物源性传播（如蝙蝠、猪），通过体液感染。

主要引发脑炎，起病急、病死率高（约38%）。

‌技术原理‌

荧光PCR技术靶向病毒保守基因。

内标RNP监控检测全程质量。

防污染设计杜绝假阳性。

试剂盒组成

新发尼帕病毒PCR荧光探针试剂盒-荧光PCR法：NiV新型尼帕病毒核酸试剂盒

【检验方法】

1. 试剂准备（试剂准备区）从试剂盒取出各组分，室温融化，充分震荡混匀，低速离心后使用。计算反应试剂使用份数 n(n=样本数+1 管阳性对照+1 管阴性对照)。

2. 样本处理（样本处理区）

2.1 核酸提取：按照提取试剂盒说明书进行操作。如样本为动物或环境来源，在样本中加入 10μL 内标质粒后，按照说明书进行核酸提取。

注意：本试剂盒中的阴性对照、阳性对照均需参与核酸提取。

2.2 加样：在上述配制好的 PCR 反应管中分别加入待测样本、阳性对照、阴性对照核酸各 5μL，终体积 25μL/管，盖紧管盖，瞬时离心。

3. PCR 扩增检测（核酸扩增区）

3.1 将反应管放入 ABI 7500 荧光 PCR 扩增仪进行扩增检测。

3.3 荧光通道及检测项目：

尼帕病毒：Reporter Dye 选择 FAM 通道，Quencher Dye 选择 none；内标：Reporter Dye 选择 ROX 通道，Quencher Dye 选择 none。（注：不选参比荧光矫正）

保存文件，设置完成后，运行反应程序。

4. 结果分析

反应结束保存结果，进入分析界面，仪器自动调节 BaseLine 的 Start值、End 值以及 Threshold 值获得分析结果。也可根据实际情况自行调整分析，其调整原则为：BaseLine 起点（Start）避开荧光采集起始阶段的信号波动，终点（End）比最早出现指数扩增的 Ct 减少 1-2 个循环。Threshold 设置为阈值线刚好超过正常阴性对照品的最高点。

5. 质量控制

5.1 阴性对照：各荧光检测通道均无扩增曲线（NO Ct）或 Ct 值＞40；

5.2 阳性对照：相应荧光检测通道均有扩增曲线且 Ct 值≤30。

以上要求需在同一次实验中同时满足，否则实验无效。