产品类别:人源细胞系
生长特性:贴壁
生长培养体系:MACOY'S5A+10%FBS;37℃,5%CO2
传代方法:1:2传代
细胞形态:上皮细胞样
冻存条件:无血清细胞冻存液保存条件:95%(ViabilitybyTrypanBlueExclusion)
细胞英文(简称)U2OS;U2-OS;U-2OS(已通过STR鉴定)
细胞名称U2OS;U2-OS;U-2OS;人骨肉瘤细胞【已通过STR鉴定】
背景资料
该细胞系(原名2T)是由PontenJ和SakselaE在1964年从一名15岁女孩的胫骨中等分化的肉瘤中分离建立的。与WI-38共培养或用抗猴空泡病毒SV40、呼吸道合胞病毒RSV或腺病毒的补体结合试验(CF法)未检测到病毒。该细胞表达胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ(IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ)受体和骨肉瘤衍生生长因子(ODGF)。
细胞来源ATCCHTB-96
代次P3
规格T25
细胞数1x10^6cells
生物安全级别2
组织来源骨肉瘤
细胞形态贴壁
细胞活力95%(ViabilitybyTrypanBlueExclusion)
细胞检测细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件MACOY'S5A+10%FBS;37℃,5%CO2
传代方法建议1:2-1:3两天换液一次
冻存条件90%FBS+10%DMSO
细胞收到后处理:
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完quan培养液并封好瓶口是细胞运输的最hao办法。收到细胞回到自己的实验室后,先打开外包装,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内,严格无菌操作,培养箱静置2-4小时。镜下观察:未超过80%汇合度时,可将瓶装的完quan培养液收集至离心管中,加入6ml完quan培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;超过80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤。(注意发货的是密封培养瓶的话,放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松)
细胞培养步骤:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完quan培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完quan培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,完quan脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。
PS:若客户收到2ml小管细胞,收到细胞后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作;将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右完quan培养基混匀,放入培养箱过夜培养后查看细胞密度:若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存。若密度超过80%,可直接进行传代