名称JM(人T淋巴细胞白血病细胞)(STR鉴定正确)
背景描述T-cell line derived from the peripheral blood of a 14-year old male with T-cell leukemia.JM is isolated from the same patient as Jurkat。JM has the ability to grow HIV.
种属人
年龄(性别)男;14岁
组织来源外周血
生长特性悬浮细胞
细胞形态淋巴细胞样
细胞类型肿瘤细胞
肿瘤类型白血病细胞
生物安全等级1
生长培养基RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
推荐传代比例3×10^5-5×10^5cells/mL
推荐换液频率2~3次/周
倍增时间~35.2 hours
冻存条件
冻存液:55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
培养条件
气相:空气,95%;CO2,5%
温度:37℃
注意事项该细胞为悬浮细胞,请注意离心收集细胞悬液;请勿直接倒掉细胞培养液。
细胞培养步骤:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完quan培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完quan培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,完quan脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。
PS:若客户收到2ml小管细胞,收到细胞后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作;将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右完quan培养基混匀,放入培养箱过夜培养后查看细胞密度:若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存。若密度超过80%,可直接进行传代(方法同上)。
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