小鼠神经元细胞NSC34
平台编号:zl-073208
规格:1×10⁶cells/T25培养瓶
细胞信息:NSC34
产品简称:NSC-34
中文名称:小鼠神经元细胞
细胞数量:1*10^6
组织来源:小鼠,胚胎小鼠脊髓细胞与小鼠神经母细胞瘤融合产生
形态特征:杂交细胞系,胚胎小鼠脊髓细胞与小鼠神经母细胞瘤融合产生
生长方式:贴壁细胞与悬浮细胞同时存在
背景描述:NSC-34是一株杂交细胞系,由富含运动神经元的胚胎小鼠脊髓细胞与小鼠神经母细胞瘤融合产生。包含两种细胞群:能够进行细胞分裂的小型未分化细胞和较大的多核细胞。这些细胞表达运动神经元的许多特性,包括胆jian乙酰转移酶、乙酰胆、jian合成、储存和释放以及神经丝三联体蛋白。
培养条件:DMEM高糖(含丙酮酸钠),10%FBS;空气95%,二氧化碳5%;37℃培养
换液频率:2-3天
传代比例:1:4-1:5
冻存液配方:95%完quan培养基,5%DMSO
安全性:BSL-1
供应限制:仅供科研
运输方式:常温运输(T25培养瓶)
运输和保存:使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后,可在1000RPM,常温条件下,离心5min后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,,添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸钠0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%完quan培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰mei,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM,常温条件下离心5分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,吹打均匀后,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。
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