中文名称：MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
英文名称：MTS Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit
产品规格：500次
产品货号：BJ-01X6321
MTS是一种新型甲臜化合物，和MTT同属四唑氮衍生物。MTS能被活细胞里的线粒体脱氢酶降解而产生棕黄色水溶性的甲臜，通过测定甲臜的光谱吸收，进而可以测定细胞的增殖情况。
| 产品特点： 1．本试剂盒是单溶液式细胞增殖与细胞毒性检测试剂，主要成分包含MTS和一个电子耦合试剂，溶液的稳定性强，反应的灵敏度高。 2．操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时，无需洗涤或收获细胞，免去溶解步骤。 3．无放射性。不需要配制液闪混合物，也不需要处理废弃物。 4．与MTT相比，使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。 5．操作灵活，与MTT不同，平板读数后可放回温箱继续孵育，使颜色进一步生成。 储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期半年。 使用效果： 96孔板中加入细胞100μL/孔(约1×104)，37℃，5% CO2细胞培养箱培养24小时，加入适当浓度的受试化合物。培养箱中孵育适当时间，每孔中加入10μL的MTS细胞增殖及毒性检测溶液。37℃孵育1-4小时。490nm波长检测光密度。 |
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
TM3(小鼠睾丸间质细胞) 5×106cells/瓶×2
TSCCa(人舌鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2
U-2 OS(人骨肉瘤细胞) 5×106cells/瓶×2
U251(人胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2
U-87 MG(人神经胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2
U-937(人组织细胞淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2
V79(仓鼠肺细胞) 5×106cells/瓶×2
VCaP(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
Vero(非洲绿猴肾细胞) 5×106cells/瓶×2
WI-38(人胚肺细胞) 5×106cells/瓶×2
WISH(人羊膜细胞) 5×106cells/瓶×2
Y1(Y-1) (小鼠肾上腺皮质细胞) 5×106cells/瓶×2
YAC-1(小鼠淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2
ZR-75-1(人乳腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
ZR-75-30(人乳腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
16HBE(人支气管上皮样细胞) 5×106cells/瓶×2
801-D (人巨细胞性肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
A2(人腺样囊性癌细胞) 5×106cells/瓶×2
A-427(人肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
A-498(人肾癌细胞) 5×106cells/瓶×2
A875(人黑色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2
肺α/β水解酶蛋白3抗体
三磷酸腺苷结合盒转运蛋白F亚基3抗体
三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A亚基5抗体
ADCK1蛋白抗体
酰基结合结构域蛋白4抗体
α/β水解酶4抗体
ADCK2蛋白抗体
乙醛脱氢酶16家庭A1抗体
粘附分子IgG样结构域蛋白3抗体
乙醇脱氢酶1抗体
δ氨基乙酰丙酸脱水酶抗体
肌侧索硬化症相关蛋白4抗体
α2巨球蛋白抗体
ACCSL蛋白抗体
甲胎蛋白抗体
β淀粉样前体蛋白结合蛋白3抗体
星形肌动蛋白抗体
系统性红斑狼疮相关蛋白TREX1抗体
磷酸化系统性红斑狼疮先关蛋白TREX1抗体
磷酸化系统性红斑狼疮相关蛋白TREX1抗体
MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒头相关蛋白复合体AP-2μ链1抗体
磷酸化接头相关蛋白复合体AP-2μ链1抗体
膜粘连蛋白7抗体
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
