人关节软骨细胞培养

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人关节软骨细胞【Human Bone: Articular Chondrocytes】
      产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的人源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时的稳定。在公司部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
实验事项：
1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
   建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
   如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

ANP32C 致瘤磷蛋白32相关蛋白1抗体  威尔氏李斯特菌
Adenosine deaminase 腺苷脱氨酶抗体  比基尼链霉菌
ASB4 含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族4抗体  砖红链霉菌
ATRNL1 ATRNL1蛋白抗体  粗糙链孢霉
AFP4a AFP4a蛋白抗体  产朊假丝酵母
APBB2 铁蛋白Fe65样蛋白1抗体  红法夫酵母
APBB3 铁蛋白Fe65样蛋白2抗体  阿舒多囊霉
APPBP2 β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2抗体  异型酒香酵母
Aph-1b 早老素稳定因子样蛋白/γ分泌酶组件蛋白APH1抗体  乙型溶血性链球菌
phospho-AKT1 (Tyr474) 磷酸化蛋白激酶AKT1抗体 
phospho-AKT1 (Ser473 + Tyr474) 磷酸化蛋白激酶AKT1抗体  福氏志贺氏菌
ASH1L ASH1L蛋白抗体  痢疾志贺氏菌
ADRA2C α2C-AR肾上腺素能受体抗体
AZI1 中心体蛋白AZI1抗体  阴沟肠杆菌
ALPK3 α蛋白激酶3抗体（心肌）  冰核细菌
ALOXE3 表皮型脂氧合酶3抗体（鱼鳞病相关蛋白）  大豆根瘤菌
ANKRD28 锚蛋白重复域28抗体  费氏志贺氏菌
AFF4 淋巴细胞相关AF4样蛋白抗体  英诺克李斯特菌
ANKRD12 锚蛋白重复结构域蛋白12抗体  单增李斯特菌
ANKRD13A 锚蛋白重复结构域蛋白13A抗体  藤黄微球菌
ANKRD9 锚蛋白重复结构域蛋白9抗体  
ANKS1A 锚蛋白重复及SAM结构域蛋白1A抗体  绿脓假单胞菌(绿脓杆菌)
APM2 脂肪特定转录因子2抗体  停乳链球菌
APOL3 载脂蛋白L3抗体  猪霍乱沙门氏菌猪霍乱亚种
ARMC3 (Cancer/testis antigen 81) 肿瘤/抗原81抗体  痤疮丙酸杆菌
ATXN7L2 共济失调蛋白7样2抗体  金针菇
ARS2 盐耐药蛋白ARS2抗体  立枯多核菌
ARSA 芳香基硫酸酯酶1抗体  普雷恩毛霉
ASNA1 盐转运三磷酸腺苷酶抗体  雅致放射毛霉＝葡匐放射毛霉
ATXN7L1 共济失调蛋白7样1抗体  婴儿双歧杆菌
AUTS2 孤独症易感基因2蛋白抗体（自闭症相关蛋白1）  普通变形杆菌
ATX2 脊髓小脑共济失调2型蛋白抗体  热带灵芝

小鼠双链DNA(mouse dsDNA) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠多巴胺(mouse Dopamine) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠二胺氧化酶(mouse DAO) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠D-二聚体(mouse D-Dimer) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠二肽基肽酶Ⅳ(mouse DPP4) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠β内啡肽(mouse β-EP) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠表皮生长因子(mouse EGF) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠表皮生长因子受体(mouse EGF R) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠内皮素-1(mouse Endothelin-1) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠噬酸性粒细胞趋化因子(mouse Eotaxin) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠促红细胞生成素(mouse EPO) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠红细胞生成素受体(mouse EPOR) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(mouse ECP) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠上皮中性粒细胞活化肽-78(mouse ENA-78) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠血管内皮抑素(mouse Endostatin) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠肾上腺素(mouse EPI) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠内皮细胞一氧化氮合酶(mouse eNOS) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠雌二醇(mouse E2) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠促卵泡素(mouse FSH) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠凋亡相关因子(mouse Fas) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠凋亡相关因子配体(mouse Fas Ligand) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠酸性成纤维生长因子(mouse a-FGF) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠碱性成纤维生长因子(mouse b-FGF/FGF-2) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠Fibronectin（mouse Fibronectin） ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠Flt3(mouse Flt3) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠Flt3配体(mouse Flt3 Ligand) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠纤维连结蛋白(mous FN) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠Fractalkine（mouse Fractalkine） ELISA 48T/96T 进口分装
人关节软骨细胞培养小鼠纤维蛋白原(mouse Fibrinogen) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠Foxp3(mouse Foxp3) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠半乳糖凝集素-9(mouse Galectin-9) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠胃泌素(mouse Gastrin) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠Ghrelin(mouse Ghrelin) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠胰高血糖素样肽-1(mouse GLP-1) ELISA 48T/96T 进口分装
小鼠胰高血糖素(mouse Glucagon) ELISA 48T/96T 进口分装

注意事项：
1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。