产品属性:
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
GAPDH3磷酸甘油醛脱氢酶检测试剂盒微量法 | 微量法 | 100管/96样 | FS-01S63495 |
商品介绍:
测定意义
GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途径的关键酶,与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关,在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
测定原理
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD,340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH活性的高低。
需自备的仪器和用品
分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容:
公司产品仅用于科研酸性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 1.5mL×1 支,4℃保存
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 1.6mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 支,4 ℃保存,用时加入 1.9mL 双蒸水,混匀,4℃保存一周;
试剂五:液体 0.7mL×1 支,4 ℃保存;
试剂六:液体 10mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂七:自备。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸馏水充分混合备用。
NAD 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NAD 标准溶液备用。
NADH 标准品:粉剂×1 支,-20℃保存。临用前加入 1.4mL 蒸馏水,即 2umol/mL,将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NADH 标准溶液备用。
操作步骤:
一、NAD+和 NADH 的提取:
1、血清(浆)中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min;取上清 200uL,加入等体积碱性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(浆),加入 0.5mL 碱性提取液,煮沸 5min(盖紧,以防止水分 散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液;混匀,10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
2、组织中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积碱性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:称取约 0.1g 组织,加入 0.5mL 碱性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(盖紧,以防 止水分散失),冰浴冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清 200uL,加入等体积酸性提取液混匀, 10000g 4℃离心 10min,取上清,冰上保存待测。
3、细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
NADH 的提取:收集 500 万细胞或细菌,加入 0.5mL 碱性提取液,超声波破碎 1min(强度 20% 或 200W,超声 2s,停 1s),煮沸 5min(盖紧,以防止水分散失),冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液 200uL 另一新的离心管中,加入等体积的酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4℃ 离心 10min,取上清,冰上保存待测。
下列是公司正在热销的产品:
鸡脂蛋白a(LP-a)试剂盒Anti-CNP Antibody流感病A抗原
鸡凋亡相关因子(FAS/CD95/TNFRSF6)试剂盒 Anti-CNP Antibody透明质/玻璃抗原
鸡抑瘤M(OSM)试剂盒Anti-CNOT7(CAF1) pAbHA tag标签多肽
鸡血浆抗凝蛋白S(PS)试剂盒 Anti-CNR2 AntibodyHA tag标签(分支多肽)
鸡苏酰tRNA合成(TARS)试剂盒 Anti-CNTN2 Antibody肝生长因子激活物抑制因子抗原
鸡转录激活因子-3(ATF-3)试剂盒 Anti-CNTN2 Antibody类血红蛋白α1抗原
鸡Bκ 轻肽基因增强子核因子抑制因子ε(Nfkbie)试剂盒 Anti-CNTFR Antibody乙型肝炎病X蛋白(HBxAg)抗原
鸡补体因子8g(C8g)试剂盒 Anti-CNTN5 Antibody乙型肝炎病X蛋白(HBxAg)抗原
鸡血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/KDR)试剂盒Anti-CNTD2 Antibody肝炎病X蛋白(HBxAg)C端抗原
鸡血管生成样蛋白3(ANGPTL3)试剂盒 Anti-CNTN6 Antibodyα亚基绒毛膜促性腺多肽抗原
鸡球蛋白G Fc片段(Fcγ)试剂盒 Anti-COL11A1 Antibody膀胱肿瘤抗原
鸡胸腺依赖性抗原(TD-Ag)试剂盒Anti-COL13A1 Antibodyc-erbB-2受体抗体(N端)
鸡绒毛膜促性腺α肽(CGα)试剂盒Anti-CNTROB Antibodyc-erbB-2受体抗原(N端)
鸡角膜蛋白(KERA)试剂盒Anti-COL14A1 Antibody肝生长因子抗原
鸡凋亡诱导因子(AIF)试剂盒 Anti-COL16A1 Antibody类疱疹病8抗原
GAPDH3磷酸甘油醛脱氢酶检测试剂盒微量法乙-1-萘酯 99%2-巯基吡-1-氧化钠盐 40%水溶液P63 protein P63 肿瘤抑制基因(抗原)
草酰二肼 97%角鲨烷 99%OPG(Osteoprotegerin) 护骨(多肽抗原)
4-磺吡鎓 98%N-乙基-2-甲基吡咯烷 98%OPGL (Osteoprotegerin ligand) 骨保护蛋白配体(抗原)
1,3-二甲基-2-咪唑啉酮 98%1-(2-二甲基基乙基)-1H-5-巯基-四氮唑 98%P311 protein 增生性瘢痕相关蛋白(抗原)
1,3-二甲基-2-咪唑啉酮 用于GC-HS, ≥99.8% (GC)1-乙基-2-吡咯烷酮 99%PARP(poly ADP-ribose polymerase) 多腺苷二磷多聚抗原
间甲 98%5-甲基四唑 98%Visfatin-1 (PBEF1)(NT) Human 内脂/内脏脂肪(人:N端多肽)、内脏脂肪、 又称:前B克隆增强因子、内肥、腹脂
扁桃苷 97%2-甲氧基-5-磺酰甲甲酯 98%Visfatin-1 (PBEF1)(NT) hu、 mo、 rat、MK 内脂/内脏脂肪(人、大、小鼠、猴同源:N端多肽)、内脏脂肪、前B克隆增强因子、内肥、腹脂
氧化苦参 98%叠氮钠 AR,99%(剧品)Visfatin-2(CT)hu、mo、rat、MK 内脂/内脏脂肪(抗人、大、小鼠、猴:N端多肽)前B克隆增强因子、内肥、腹脂
注意事项:
1、操作过程应避光。不可将试剂一、二、三和四混合后再加,必须分开加。
2、反应过程要注意避光。
3、当吸光值大于 1 时,建议稀释后测量,计算公式中应当乘以稀释倍数。