小鼠角膜上皮细胞提取物培养

小鼠角膜上皮细胞提取物【Mouse Eye: Normal Corneal Epithelial CellsDerivatives】

小鼠角膜上皮细胞提取物是从小鼠原代角膜上皮细胞提取的，小鼠原代角膜上皮细胞从正常小鼠眼组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。 

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

运输和保存；

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

抗生素（氯霉素、沙星类、甲硝唑类） 快速检测三拼卡96Tn-Octylbenzene2189-

糖皮质激素快速检测三拼卡96TNitrendipine3956尼群地平

花生源性恒温核酸检测试剂盒24T/48TNisoldipine636752尼索地平

马、驴源性恒温核酸检测试剂盒24T/48TNifuroxazide9652硝呋酚酰肼

牛源性恒温核酸检测试剂盒24T/48TNifedipine218295硝苯地平
HumanPlatelet-DerivedGrowthFactor-BB，PDGF-BBELISAKit人血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)ELISA试剂盒规格：96T/48T  2,2'-Bicinchoninic acid  中文名：2,2'-二辛可宁酸  分子式：C20H12N2O4 

HumanPlatelet-DerivedGrowthFactorAB，PDGF-ABELISAKit人血血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒规格：96T/48T  2-(Chloromethyl)-4-methylquinazoline  109113-72-6  中文名：  分子式：C10H9ClN2 

Humanplatelet-derivedgrowthfactor，PDGFELISAKit人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒规格：96T/48T  2,2'-Anhydro-5-methyluridine  22423-26-3  中文名：2,2'-O-脱水-5-甲基尿嘧啶核苷  分子式：C10H12N2O5 

Humanplateletbasicprotein,PBPELISAKit人血小板碱性蛋白(PBP/CXCL7)ELISA试剂盒规格：96T/48T  2-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl)propane-1,2-diol  中文名：  分子式：C8H16O4 

Humanplatelet-associatedimmunoglobulins,PAIgELISAKit人血小板相关球蛋白(PAIg)ELISA试剂盒规格：96T/48T  2-(5-Chloro-2-phenoxyphenyl)acetic acid  中文名：  分子式：C14H11ClO3
细胞松弛素E(>98%，BR)  Cytochalasin E  质量规格：>98%，BR 活体细胞氧化应激活性氧(ROS)原位荧光染色试剂盒(羟自由基)20

D-樟脑酸(>99%,BR)  D-(+)-Camphoric acid  质量规格：>99%,BR 活体细胞组织蛋白酶B(CATHEPSINB)活性原位荧光染色检测试剂盒20

D(+)-二苯甲酰一水(>98%，BR)  D-(+)DBTA, Dibenzoyl-D-tartaric acid, monohydrate  质量规格：>98%，BR 活体细胞组织蛋白酶K(CATHEPSINK)活性原位荧光染色检测试剂盒20

己二烯二胺(>98%，BR)  DATD, (+)-N,N'-Diallyltartramide  质量规格：>98%，BR 活体细胞组织蛋白酶L(CATHEPSINL)活性原位荧光染色检测试剂盒20

十二烯基丁二酸酐(>98%，BR)  DDSA, dodecenylsuccinic anhydrous  质量规格：>98%，BR 活体组织线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒10

癸二酸(>96%，BR)  Decanedioic acid  质量规格：>96%，BR 活体组织氧化应激活性氧(ROS)初级绿色荧光测定试剂盒40/100

脱氢乙酸(>98%，BR)  Dehydroacetic acid  质量规格：>98%，BR 活体组织氧化应激活性氧(ROS)高质绿色荧光测定试剂盒8/20

脱羰秋水仙碱  Demecolcine  质量规格：>98%，进分 活体组织氧化应激活性氧(ROS)荧光测定试剂盒(氯酸离子)20

DON，呕吐；脱氧雪腐镰刀菌烯醇(>98%(HPLC),BR)  Deoxynivalenol  质量规格：>98%(HPLC),BR 活体组织氧化应激活性氧(ROS)荧光测定试剂盒(过氧亚硝基阴离子)20

第威德合金  Devarda's alloy  质量规格：工业级 火炬松(loblollypine)培养基500毫升溶液/片剂
小鼠角膜上皮细胞提取物培养内皮细胞合酶 (eNOS)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装     Oxandrolone  53-39-4  中文名：氧甲氢龙  分子式：C19H30O3 

内皮素受体A   英文名称：   Human Endothelin Receptor A   规格：   48T/96T   英文缩写：   EA  2''-O-Acetylsprengerinin C  中文名：  分子式：C46H72O17 

内皮素 -1(Endothelin-1)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Oxandrolone  中文名：氧甲氢龙  分子式：C19H30O3 

腺来源的内皮生长因子   英文名称：   endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor   规格：   48T/96T   英文缩写：   EG-VEGF  β-Sitosterol  83-46-5  中文名：β-谷甾醇  分子式：C29H50O  度：98.0%  关键词：  豆甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

内啡肽 - b (Endorphin- b )   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Oxandrolone  53-39-4  中文名：氧甲氢龙  分子式：C19H30O3  度：98.0%  关键词：