大鼠肠静脉内皮细胞提取物胞培养

大鼠肠静脉内皮细胞提取物胞【Rat Intestinal: Normal Intestinal Vein Endothelial Cell Derivatives】

大鼠肠静脉内皮细胞提取物胞是从大鼠肠静脉内皮细胞提取的，大鼠肠静脉内皮细胞从正常大鼠肠静脉组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

 实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

谷胱甘肽还原酶 GR   0U17-Ethylendioxyandrosta,4-dien-one2398317-亚乙二氧基-雄,4-二烯-酮

果胶酶Y3   0mg3β-Acetoxyα-androstan7β-ol03-乙酰基α-雄烷二醇

过氧化氢酶 Catalase   1g 17β-Benzoyloxy-androsta,4-dien-one141617β-苯甲酰氧基-雄甾,4-二烯-酮

还原型谷胱甘肽(GSH)   1g/5g 5α-Androstaneβ,17β-diol575α-雄烷二醇

己糖激酶(HK)   25mg3-O-Methyl-methoxymaxterone92283-O-甲基-甲氧基α-雄烷二醇
Human pulmonary surfacta associated protein B (SP-B) ELISA Kit 人肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)ELISA试剂盒  2',3'-Di-O-acetyl-5'-deoxy-5-fluorocytidine  161599-46-8  中文名：  分子式：C13H16FN3O6 

Human pulmonary surfacta associated protein A (SP-A) ELISA Kit 人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒  2,4-Bis(α,α-dimethylbenzyl)phenol  中文名：2,4-双(α,α-二甲基苯甲基)苯酚  分子式：C24H26O 

Human plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) ELISA Kit 人纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA试剂盒  1-Amino-4-hydroxyanthraquinone  116-85-8  中文名：1-氨基-4-羟基蒽醌  分子式：C14H9NO3 

Human plasminogen activator inhibitor (PAI) ELISA Kit 人纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA试剂盒  1-Benzyl D-aspartate  中文名：D-天冬氨酸1-苄酯  分子式：C11H13NO4 

Human plasminogen activator (PLGA) ELISA Kit 人纤溶酶原激活剂(PLGA)ELISA试剂盒  1-Benzyl-5-ethoxyhydantoin  中文名：1-苄基-5-乙氧基海因  分子式：C12H14N2O3
通关藤苷X HPLC≥98% 20mg MouselymphocytefactorELISA试剂盒小鼠细胞因子ELISA试剂盒规格：96T/48T

卡瓦黄素内酯B HPLC≥97% 20mg Mouselymphocytefunctionassociatedaigen3,LFA-3ELISA试剂盒小鼠细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA试剂盒规格：96T/48T

连翘酯苷I HPLC≥98% 5mg Mouselymphotactin,Lptn/LTNELISA试剂盒小鼠细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

连翘酯苷H HPLC≥98% 5mg MouseLysozyme,LZMELISA试剂盒小鼠溶菌酶(LZM)ELISA试剂盒规格：96T/48T

连翘酯苷F HPLC≥98% 5mg MouseLysozyme,LZMELISA试剂盒小鼠溶菌酶(LZM)ELISA试剂盒规格：96T/48T

甲基基苦参醇C HPLC≥98% 5mg MouseMacrophageColony-StimulatingFactor,M-CSFELISA试剂盒小鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

苦参醇X HPLC≥98% 5mg MouseMacrophage-DerivedChemokine,MDCELISA试剂盒小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒规格：96T/48T

苦参醇W HPLC≥98% 5mg MouseMacrophageInflammatoryProtein1β,MIP-1βELISA试剂盒小鼠巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA试剂盒规格：96T/48T

苦参醇N HPLC≥98% 5mg MouseMacrophageInflammatoryProtein1δ,MIP-1δELISA试剂盒小鼠巨噬细胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA试剂盒规格：96T/48T

苦参醇S HPLC≥98% 5mg MouseMacrophageInflammatoryProtein2,MIP-2ELISA试剂盒小鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
大鼠肠静脉内皮细胞提取物胞培养人周期素依赖性激酶4(CDK-4)ELISA试剂盒     2-Hydroxyquinoxaline  1196-57-2  中文名：  分子式：C8H6N2O 

人周期素依赖性激酶2elisa试剂盒   人周期素依赖性激酶2试剂盒   规格型号：96T/48T   人周期素依赖性激酶2试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人周期素依赖性激酶2试剂盒、人周期素依赖性激酶2 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  2-Hydroxyquinoxaline  中文名：  分子式：C8H6N2O  度：98.0%

人周期素依赖性激酶2(CDK2)酶联吸附测定试剂盒   Human CDK2 (Cyclin Depende Kinase 2) ELISA Kit  2-Hydroxy-3-methylanthraquinone  17241-40-6  中文名：  分子式：C15H10O3 

人周期素依赖性激酶2(CDK-2)ELISA试剂盒     2-Hydroxy-3-methylanthraquinone  中文名：  分子式：C15H10O3  度：%

人周期素依赖性激酶2(CDK-2)ELISAKit     2-Methoxystypandrone  85122-21-0  中文名：  分子式：C14H12O5

运输和保存：
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。