大鼠小梁网细胞提取物说明书

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大鼠小梁网细胞提取物【Rat Eye：Normal Trabecular Meshwork Cells Derivatives】

大鼠小梁网细胞提取物是从大鼠原代小梁网细胞提取的，大鼠原代小梁网细胞从正常大鼠眼组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

蛋白酶抑制剂混合物（0×，植物样品提取用）1ml/5×1ml 2-Benzoylpyridine1991/2/12-苯甲酰吡啶

反式玉米素核苷溶液(TZR)5×1ml2-Benzoylbenzoic acid8522-苯甲酰苯甲酸

反式玉米素溶液 1mg/ml5×1ml 2-Benzoylacetanilide95962-苯甲酰基

  fluorideg 2-Benzoyl,3,4,4a,5,8a-hexahydro(2H)-isoquinolinone5234642-苯甲酰,3,4,4a,5,8a-六氢(2H)-异酮

核酸快速银染试剂盒25次 2-Benzothiazolyl diethyldithiocarbamate9二乙基二硫代氨基甲酸 2-苯并噻唑酯
Ginsenoyne K  中文名：  分子式：C17H24O3    猪抗凝血酶受体(A)ELISAKit  

Gimeracil  中文名：吉莫斯特  分子式：C5H4ClNO2    中文名称   方法   规格

Gemcitabine  中文名：吉西他滨  分子式：C9H11F2N3O4    猪组胺(HIS)ELISAKit  

Gefitinib  中文名：吉非替尼  分子式：C22H24ClFN4O3    猪雌二醇(E2)ELISAKit               

Gatifloxacin Mesylate  中文名：甲磺酸加替沙星  分子式：C20H26FN3O7S    猪可溶性E选择素(sE-selectin)ELISAKit
四双酚A双(2-羟乙基)醚(>93.0%(GC))  Tetrabromobisphenol A Bis(2-hydroxyethyl) Ether  质量规格：>93.0%(GC) 英文名称HumanAEA(IgG,M)ELISAKit人抗子宫内膜抗体(AEA)规格：96T/48T

4,4'-(六氟异亚丙基)二酞酸酐(>98.0%(GC)(T))  4,4'-(Hexafluoroisopropylidene)diphthalic Anhydride  质量规格：>98.0%(GC)(T) 英文名称HumanAGRPELISAKit人Agoi相关蛋白(AGRP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

3,3',4,4'-二苯酮四羧酸二酐(>96.0%(T))  3,3',4,4'-Benzophenonetetracarboxylic Dianhydride  质量规格：>96.0%(T) 英文名称HumanaicardiacmuscleaibodyELISAKit人抗心肌抗体(CMA)规格：96T/48T

三环[6.4.0.02,7]十二烷-1,8:2,7-四羧酸二酐(>98.0%(GC))  Tricyclo[6.4.0.02,7]dodecane-1,8:2,7-tetracarboxylic Dianhydride  质量规格：>98.0%(GC) 英文名称HumanAIL(h)ELISAKIT人AIL规格：96T/48T

ε-己内酯(>99.0%(GC))  ε-Caprolactone  质量规格：>99.0%(GC) 英文名称HumanAILR1(h)ELISAKIT人AILR1规格：96T/48T

β-丙内酯(>95.0%(GC)(T))  β-Propiolactone  质量规格：>95.0%(GC)(T) 英文名称HumanAILR2(h)ELISAKIT人血小板生成素(TPO)规格：96T/48T

DL-丙交酯(>98.0%(T))  DL-Lactide  质量规格：>98.0%(T) 英文名称HumanAILR3(h)ELISAKIT人AILR3规格：96T/48T

L-(-)-交酯(>98.0%(T))  L-(-)-Lactide  质量规格：>98.0%(T) 英文名称HumanAILR4ELISAKIT人AILR4规格：96T/48T

δ-戊内酯(>98.0%(GC))  δ-Valerolactone  质量规格：>98.0%(GC) 英文名称Humanai-melanocyteELISAKit人黑色素细胞抗体(melanocyte)ELISA试剂盒规格：96T/48T

1,3-双(六氟-α-羟基异丙基)苯(>98.0%(GC))  1,3-Bis(hexafluoro-α-hydroxyisopropyl)benzene  质量规格：>98.0%(GC) 英文名称HumanainuclearaibodyELISAKIT人抗核抗体(ANA)规格：96T/48T
大鼠小梁网细胞提取物说明书山羊脑啡肽（ENK）ELISA试剂盒     3H-1,2-Benzodithiol-3-one-1,1-dioxide  66304-01-6  中文名：3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮-1,1-二氧化物  分子式：C7H4O3S2  度：90.0%  关键词： 

山羊球蛋白G   英文名称：   Immunoglobulin G   规格：   48T/96T   英文缩写：   IgG  3-Ethyl-4-methyl-3-pyrrolin-2-one  766-36-9  中文名：  分子式：C7H11NO  度：98.0%  关键词： 

山羊球蛋白A   英文名称：   Immunoglobulin A   规格：   48T/96T   英文缩写：   IgA  3-Ethoxyandrosta-3,5-dien-17β-ol  26614-48-2  中文名：3-乙氧基雄-3,5-二烯-17β醇  分子式：C21H32O2  度：93.0%   

山羊检测(e)ELISA试剂盒              3-Benzyl-5-(2-hydroxyethyl)-4-methylthiazolium chloride  中文名：3-苄基-5-(2-羟乙基)-4-甲基氯化噻唑鎓  分子式：C13H16ClNOS 

山羊坏死因子αelisa试剂盒   山羊坏死因子α试剂盒   规格型号：96T/48T   山羊坏死因子α试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：山羊坏死因子α试剂盒、山羊坏死因子α elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  3-Ethoxy-4-ethoxycarbonyl phenylacetic acid  99469-99-5  中文名：  分子式：C13H16O5  度：98.0%  关键词：

注意事项：

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。