细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人髓母细胞瘤细胞；Daoy说明书准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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产品描述：
细胞名称 人髓母细胞瘤细胞；Daoy说明书
形态特性多角
生长特性贴壁生长
特征特性该细胞是1985年由JacobsenPF建立的,源自一名4岁大的儿童的后颅窝肿瘤的活检组织，未检出神经元和胶质分化的特征；可用作转染宿主。
培养条件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
传代方法1:4~1:6传代；每周换液2~3次。
传代情况C4
冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测培养法（-）
STRAmelogenin：X；CSF1PO：11；D13S317：13，14；D16S539：10；D18S51：12；D19S433：14，14.2；D21S11：29，31.2；D2S1338：16，17；D3S1358：15；D5S818：11，13；D7S820：8，10；D8S1179：13，15；FGA：23；TH01：9；TPOX：8，10；vWA：14，20；
同工酶
染色体
注意事项：
1.一般客户拿到人髓母细胞瘤细胞；Daoy说明书后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
AHA*人抗组蛋白抗体规格48T/96T
H2A-H2B*人抗组蛋白规格48T/96T
EMAb*人抗子宫内膜抗体规格48T/96T
ATA*人抗滋养膜细胞抗体规格48T/96T
ACA/CENP*人抗着丝点抗体规格48T/96T
ANGA*人抗中性粒细胞颗粒抗体规格48T/96T
ANA*人抗中性粒细胞抗体规格48T/96T
pANCA*人抗中性粒细胞核周抗体规格48T/96T
cANCA*人抗中性粒细胞胞浆抗体规格48T/96T
ACA*人抗中性粒/中心体抗体规格48T/96T
人髓母细胞瘤细胞；Daoy说明书Ubiquitin泛素蛋白Ubiquitin泛素蛋白0.5mgUbiquitin泛素蛋白
UCN(Urocortin)mouseret新型血管活性因子UCN抗原(小鼠、大鼠)0.5mgUCN(Urocortin
C端抗原URGCP/URG4(Up-regulatorofcellproliferation)Cterminal肝炎病毒X蛋白(HBxAg)C端抗原0.5mgURGCP/URG4(Up-regulatorofcellproliferation
抗原URGCP/URG4(Up-regulatorofcellproliferation)乙型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)抗原0.5mgURGCP/URG4(Up-regulatorofcellproliferation
上游刺激因子1抗原USF-1(upstreamstimulatoryfactor1)上游刺激因子1抗原0.5mgUSF-1(upstreamstimulatoryfactor1
G蛋白偶联受体14抗原UTS2R/GPR14(UrotensinIIreceptor：GProteinCoupledReceptor14)G蛋白偶联受体14抗原0.5mgUTS2R/GPR14(UrotensinIIreceptor：GProteinCoupledReceptor14
V5tag多肽抗原V5tag(recombinantV5-taggedprotein)V5tag多肽抗原0.5mgV5tag(recombinantV5-taggedprotein
VAP1(vascularadhesionprotein1)血管粘附蛋白1（多肽抗原）0.5mgVAP1(vascularadhesionprotein1
冷冻保存细胞之方法：
人髓母细胞瘤细胞；Daoy说明书冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
