【明胶-琼脂糖凝胶4FF】参数_使用方法

【明胶-琼脂糖凝胶4FF】参数及使用方法，简介由上海远慕生物提供讲述，本司的琼脂糖凝胶有：谷胱甘肽-琼脂糖凝胶 4FF，苯甲脒-琼脂糖凝胶 6B，蓝色-琼脂糖凝胶 6FF，肝素-琼脂糖凝胶 6FF，红色-琼脂糖凝胶 6FF， 辛基-琼脂糖凝胶 H.P.，辛基-琼脂糖凝胶 4FF，丁基-琼脂糖凝胶 4FF，更多系列请!

【明胶-琼脂糖凝胶4FF参数说明】

中文名：明胶-琼脂糖凝胶4FF

英文名：Gelatin Sepharose 4FF

供应商：上海远慕

规格：25ml、100ml

基质：4%交联琼脂糖

形状：球形

粒径：45~165 μm

耐压：0.3MPa

耐热：120℃,pH7,水中20min

zui高流速：250cm/h

排阻极限：60000~20×106 (球蛋白)

【明胶-琼脂糖凝胶4FF】参数_使用方法

【明胶-琼脂糖凝胶4FF简介】

明胶-琼脂糖凝胶4FF是采用溴化氰法将明胶耦合到琼脂糖凝胶4FF基质上的一种亲和层析填料；明胶是一种高分子糖蛋白，在多种细胞的表面和许多细胞外液(包括血浆)中都发现了明胶的存在，它可以特异性的结合纤维连接蛋白；明胶琼脂糖凝胶4FF是专为纯化或除去纤维连接蛋白的一种亲和层析填料。

【明胶-琼脂糖凝胶4FF使用方法】

1、准备凝胶

a、让凝胶和所有的试剂达到工作时的温度。

b、配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。

c、明胶琼脂糖凝胶4FF是保存在20%的乙醇溶液中，取适量凝胶，清洗掉20%的乙醇，抽干。用缓冲液(按凝胶：缓冲液=3：1的比例)配成匀浆。

2、装柱

a、将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜)，务必使底端无气泡。

b、用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

c、打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

3、平衡

让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

4、上样

a、样品用平衡液配制，常用磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液，浑浊的样品要离心和过滤后上样。

b、一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

5、洗脱

明胶-琼脂糖凝胶4FF可以采用不同的方式洗脱纤维连接蛋白：

a、使用含有溴盐的缓冲液，例如溴化钠或溴化钾，并在低于平衡缓冲液pH值的条件下洗脱。一种推荐的洗脱缓冲液是：0.05M的醋酸钠，pH值5.0，含1.0M的溴化钠或溴化钾。

b、可以在平衡缓冲液中加入8M的脲，来洗脱吸附在凝胶上的纤维连接蛋白。

c、纤维连接蛋白还可以通过在平衡缓冲液中添加精氨酸来进行洗脱。

6、再生

根据样品的性质，明胶琼脂糖凝胶4FF可以再生，以达到重复使用的目的。可以采用2-3柱体积的高pH值(0.1M的Tris-HCl，0.5MNaCl，pH值8.5)的缓冲液和低pH值(0.1MNaAC，0.5MNaCl，pH值4.5)的缓冲液交替清洗凝胶。一个周期重复3次，然后用3-5倍柱体积的平衡缓冲液平衡，即可进行下次试验。如果在纯化过程中使用了洗涤剂或变性剂　(如8M尿素)，那么这些洗涤剂也可以用于洗脱缓冲液中。

7、清洗

在一些应用中，像变性的蛋白质或脂类这样的样品，在再生过程没有被洗脱下来，可以通过加入一些洗涤剂，例如：0.1%的TritonX-100，在37°C的条件下洗一会。立即用至少5倍柱体积的结合缓冲重新平衡。

8、储存

明胶-琼脂糖凝胶4FF应储存在4-8℃，20%的乙醇溶液中。

特别注意：上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。

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