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人胃癌细胞SNU-5细胞 抗体库技术

2013年08月09日 10:02通派(上海)生物科技有限公司点击量:1274

人胃癌细胞SNU-5细胞   抗体库技术

 
 90年代初提出了抗体库技术。抗体库技术简单地说就是用细菌克隆取代B细胞克隆来表达抗体库(repertoire)。由于RT-PCR技术的发展,大肠杆菌直接表达有功能性抗体分子片断的成功以及噬菌体显示技术(phage display)的问世,在90年代初出现噬菌体抗体库(phage antibody library)技术,该技术使得人们从应用DNA重组技术改造现有的单抗发展到用基因工程技术克隆新的单抗,从而使抗体工程进入一个全新的时期。
  人胃癌细胞SNU-5细胞   抗体库技术噬菌体抗体库 继杂交瘤技术之后又一突破性进展的用于制备新型抗体的是噬菌体抗体库技术。Winter等人在1994年创建了噬菌体抗体库技术,克服了人体不能随意免疫的缺点,用人的外周血制备抗体文库,从而获得人源性基因工程抗体。而且将抗体基因的克隆和表达融为一体,同在一种载体上进行,将抗体基因表达在载体的表面,用固相化抗原对表达产物的载体进行淘筛(panning),在数日内就可筛选出阳性克隆,从而能构建出大库容文库囊括天然全套抗体基因,人们*可以用基因工程方法研制任何一种具有高度特异性的抗体,使抗体工程的设想成为现实。采用噬菌体抗体库技术筛选抗体不必进行动物免疫,易于制备稀有抗原的抗体及筛选全人源性抗体、高亲和力抗体。同时也将抗体工程的研究推向了新高潮。
1.方法简单易行,节省时间。可通过发酵生产、大量制备。
  2.筛选容量增大,可在数周内筛选100万-1亿个克隆,可获得高亲和力的人源化抗体。
  3.可直接从未经免疫的人或小鼠的淋巴细胞中得到抗体基因或IgV区基因,因此可以获得*人源化的抗体,克服了人杂交瘤细胞不稳定的缺点,避开了人工免疫和杂交瘤技术。
 人胃癌细胞SNU-5细胞   抗体库技术 4.可模仿体内免疫过程,模拟天然全套抗体库,方便的“制造”和克隆针对任何抗原的抗体。
  随着基因工程抗体技术的发展,在我国有些实验室开始了噬菌体抗体库的构建。用抗体库技术可直接制备人源抗体,例如利用被病原微生物感染的病人外周血细胞制备噬菌体抗体库,用特定抗原进行筛选,获得抗乙肝表面抗原、甲肝病毒的人源抗体。抗体库技术也被用于抗体性能改良,例如用链替换方法,以亲本抗体的一条链(轻链)与另一条链 ( 重链)的文库组合,构建抗体库,筛选高亲和力的克隆,再固定重链,用同样方法选择具有更高亲和力的轻链。一些特异性好、有应用前景的鼠抗体,利用抗原表位定向选择(EGS)方法,以鼠单抗可变区为模板,经噬菌体展示技术,通过抗原导向,筛选能够模拟鼠单抗可变区、结合相同抗原决定簇的人抗体,经这一方法获得人源抗体。国内也有实验室在计算机辅助设计下,将鼠抗体表面氨基酸残基“人源化”,主要将鼠 Fv段表面暴露的骨架区残基中与人Fv不同者改为人源性,使Fv的表面人源化,但仍保留其与抗原结合的特性。目前的问题是,有很多试剂型抗体或诊断用抗体进入市场,而治疗用抗体只有少数进入临床试验。分析主要原因,一是工程抗体表达量低。国内很多实验室,真核细胞中抗体表达量在1 毫克/升以下,很难用于生产。仅个别实验室在对载体进行改造后,抗体表达量达到40毫克/升。二是动物细胞规模化培养技术还不成熟,与国外相比存在很大差距。由于技术和经费等原因,我们动物细胞培养的规模zui大为50升,培养方式大多是采用微载体,悬浮批次和悬浮灌流尚属空白。在噬菌体抗体库的基础上,在近几年又发展了核糖体展示抗体库技术。核糖体展示抗体库技术代表了抗体工程的将来发展趋势。
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