ACK红细胞裂解液的作用原理及使用步骤

　　ACK红细胞裂解液的作用原理及使用步骤

　　红细胞裂解液是一种去除红细胞的方法，即用裂解液裂解红细胞，它既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞。

　　红裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法，主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化，淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。

　　经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞，可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。

　　红细胞裂解液的作用原理：

　　细胞裂解液一般都使用含酶的，在血红细胞表面上有红细胞专属的表面抗原，当裂解液中可以攻击特定红细胞表面抗原的酶的时候就只会造成红细胞的变性，生物通道扩大、裂解，或者引起红细胞的变性而不会攻击其它的细胞，另外红细胞有自己的电负性、渗透脆性(通常是一些非酶细胞裂解液的突破点)悬浮稳定性，这都是区别于其他种类细胞的区别点。

　　红细胞裂解液就是利用这些特性裂解红细胞的，另外红细胞裂解液不能达到100%准确的裂解红细胞，总会或多或少导致其他种类细胞的裂解。

　　产品简介：

　　红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也称ACK Lysis Buffer，是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。

　　本裂解液经过优化配方，在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。 本裂解液的主要有效成分为氯化铵。本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解

　　本裂解液经过无菌处理，处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。

　　产品内容：

　　货号 PMK0011-120 PMK0011-500

　　红细胞裂解液 120ml 500ml

　　使用步骤：

　　对于组织细胞样品：

　　1.新鲜组织经过胶原酶或ym等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。

　　2.加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入3-5ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。

　　3.400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。

　　4.如果发现红细胞裂解不，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

　　5.洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。可再重复1次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。

　　6.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

　　对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤：

　　1.新鲜组织经过胶原酶或ym等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。

　　2.对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。本步骤在室温或4度操作均可。

　　3.加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。

　　4.400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。

　　5.如果发现红细胞裂解不wq，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

　　说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程中的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。

　　对于血液样品：

　　1.取新鲜抗凝血，400-500g离心5分钟，离心弃上清。

　　2.加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入6-10ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。注意：对于鼠的血液，裂解1-2分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至4-5分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。

　　3.400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。

　　4.如果发现红细胞裂解wq全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

　　5.洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。可再重复1次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。

　　6.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

　　对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤：

　　1.每1ml新鲜抗凝血中加入10ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解4-5分钟。本步骤在室温或4度操作均可。注意：对于鼠的血液，裂解4-5分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10分钟，但通常不宜超过15分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。

　　2.加入20-30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。

　　3.400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。

　　4.如果发现红细胞裂解不wq，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

　　5.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

　　说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。

　　注意事项：

　　本裂解液为无菌产品，请注意保持无菌，使用本产品时宜在超净工作台内进行。

　　如果经过红细胞裂解液处理后的样品后续用于总RNA的提取，在处理细胞时不必使用经过DEPC处理过的溶液。

　　本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

　　为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

　　红细胞裂解液上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。