MCA线粒体柠檬酸检测试剂盒微量法 返回列表页

商品介绍：

测定意义

CA是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物，由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。

配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度，（2）综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况，（3）乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。

测定原理：

CA在柠檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性条件下，α-酮酸进一步与苯肼反应，生成相应的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰，该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。
产品属性：

产品内容：

酸性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；

碱性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 1.5mL×1 支，4℃保存

试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 1.6mL 双蒸水，混匀，4℃保存一周；

试剂四：粉剂×1 支，4 ℃保存，用时加入 1.9mL 双蒸水，混匀，4℃保存一周；

试剂五：液体 0.7mL×1 支，4 ℃保存；

试剂六：液体 10mL×1 瓶，4 ℃保存；

试剂七：自备。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸馏水充分混合备用。

NAD 标准品：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入 1.5mL 蒸馏水，即 2umol/mL，将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NAD 标准溶液备用。

NADH 标准品：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入 1.4mL 蒸馏水，即 2umol/mL，将其稀释为 1.25nmol/mL 的 NADH 标准溶液备用。

操作步骤：

一、NAD+和 NADH 的提取：

1、血清（浆）中 NAD+和 NADH 的提取：

NAD+的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.5mL 酸性提取液，煮沸 5min (盖紧，以防止水分 散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min；取上清 200uL，加入等体积碱性提取液；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清，冰上保存待测。

NADH 的提取：取 0.1mL 血清（浆），加入 0.5mL 碱性提取液，煮沸 5min(盖紧，以防止水分 散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积酸性提取液；混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

2、组织中 NAD+和 NADH 的提取：

NAD+的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.5mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧，以防 止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积碱性提取液混匀， 10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

NADH 的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.5mL 碱性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧，以防 止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200uL，加入等体积酸性提取液混匀， 10000g 4℃离心 10min，取上清,冰上保存待测。

3、细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取：

NAD+的提取：收集 500 万细胞或细菌，加入 0.5mL 酸性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％ 或 200W，超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液 200uL 另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4℃ 离心 10min，取上清,冰上保存待测。

NADH 的提取：收集 500 万细胞或细菌，加入 0.5mL 碱性提取液，超声波破碎 1min（强度 20％ 或 200W，超声 2s，停 1s），煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液 200uL 另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4℃ 离心 10min，取上清,冰上保存待测。

注意事项：

1、公司产品仅用于科研操作过程应避光。不可将试剂一、二、三和四混合后再加，必须分开加。

2、反应过程要注意避光。

3、当吸光值大于 1 时，建议稀释后测量，计算公式中应当乘以稀释倍数。

下列是公司正在热销的产品：

硒蛋白P小鼠球蛋白IgGselenoprotein

硝盐还原小鼠球蛋白IgMNitrate reductase

甘丙肽小鼠球蛋白IgAGalanin

醇大鼠基质金属蛋白2/明胶ACortisol

皮质酮;肾上腺酮组织蛋白抗体Corticosterone

细胞色P450家族成员2C19乳铁传递蛋白/乳铁蛋白抗体IgGCytochrome P450 2C19

有机阳离子转运体2大鼠基质金属蛋白8/中性粒胶原organic cation transporters 2

尿苷二磷葡萄糖醛转移抗通透性增高蛋白抗体UDP-glucumno-syltransferase

丝；苏蛋白激4大鼠5核苷p21-activated kinases4

肽基脯酰顺反异构大鼠骨保护Peptidyl prolyl cis/trans isomerase

抗N蛋白抗体髓过氧化物特异性抗中性粒胞质抗体IgGN-type protein antibody

信号4A抗蛋白3抗体IgGSEMA4A

微粒体三酰甘油转移大鼠B因子Microsomal triglyceride transferase

CD40分子大鼠抑瘤MCluster of differentiation 40

异质性胞核核糖核蛋白K抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgAHeterogeneous nuclear ribonucleoprotein K
MCA线粒体柠檬酸检测试剂盒微量法乙脱氢1抗体Human MAGIX ELISA Kit红生成（EPO）ELISA试剂盒--动物，人

δ基乙酰脱水抗体Human MAGEB18 ELISA Kit小鼠β基己糖苷A（β-Hex A）ELISA试剂盒,

肌侧索硬化症相关蛋白4抗体Human MAGEA8 ELISA Kit小鼠肺表面活性物质相关蛋白A（SP-A）ELISA试剂盒,

α2巨球蛋白(α-2M)抗体Human MAGOH ELISA Kit小鼠叠氮（AZT）ELISA试剂盒,

ACCSL蛋白抗体Human MAGT1 ELISA Kit小鼠抗心磷脂抗体IgG（ACA-IgG）ELISA试剂盒,

甲胎蛋白抗体Human MAGEB18 ELISA Kit腮腺炎病IgG ELISA试剂盒--动物，人

β淀粉样前体蛋白结合蛋白3抗体Human LZTS2 ELISA Kit（HYD）ELISA试剂盒--动物，人

星形肌动蛋白抗体Human MAGEB4 ELISA Kit小鼠αN已酰基葡糖苷（αNAG）ELISA试剂盒,