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货号 | A098441 |
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检测程序:
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品 100ul ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。
3. 每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗处反应15 分钟。
8. 每孔加入100ul 终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。
检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本..需要而未提供
产品全称:AsAb 检测试剂盒
英文名称:AsAb ELISA Kit
产品货号:A098441
规格:48T/96T
服务:公司产品仅用于科研可提供免费代测服务,以及产品说明书和技术指导等
保存环境:2-8℃低温、避光、防潮
主要成分:酶标板,试剂,标准品等
试剂盒组成及试剂配制 :
1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。 2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。 3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。 4. 标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。 5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。 6. 标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100) 7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100) 8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 |
样本实验前准备:
ELISA试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
(1)血清
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(3)尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
(4)细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
(5)培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(6)组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
操作流程:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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AsAb 检测试剂盒西林磷化信号转导分子SMAD3抗体荧光素标记亲合素
西林磷化信号转导分子SMAD2抗体5'-脱氧-5-氟胞
西林(标准品)磷化核突触蛋白α抗体5'-脱氧-5-氟胞
醋锌(二水)磷化核突触蛋白α抗体5'-脱氧-5-氟胞
磷化神经突触素1抗体软骨素硫钠盐
磷化神经突触素1抗体美托洛尔
(标准品)磷化神经突触素1抗体美托洛尔
钠磷化神经突触前膜胞内蛋白抗体美托洛尔
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