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247次 而且质量也是参差不齐,那么我们怎样才能选出zui适用的产品呢?首先要根据我们所要检测的分子进行检测,除此以外也还有一些需要加以考量的因素,下面就为大家提供几点参考。
1. 实验类型:
ELISA试剂盒有多种类型,不过它们都有一个共同特点,就是进行抗原捕获。一般捕获形式包括将抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。通常人们使用双抗夹心法进行ELISA实验,双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和检测抗体之间,这种方法既灵敏又有效,受到了许多研究者的青睐。
2. 抗体类型:
单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA,实际上有时候二者结合效果更好。例如,对于双抗夹心法而言,用多抗进行捕获而单抗进行检测有时更有帮助。双抗夹心法ELISA中捕获抗体与检测抗体(不论多抗还是单抗)的配对很有讲究。我们不希望捕获抗体与检测抗体竞争抗原上的同一位点,为此我们就需要确保捕获抗体和检测抗体所识别的抗原表位不存在重叠。
3. 交叉反应:
如果抗体间发生冲突或交叉反应就会影响整个实验的特异性。其中抗体来源所带来的兼容性就是交叉反应的一个因素。尽管现在购买源自动物的抗体越来越容易,我们仍有必要确认一下是否会产生交叉反应的问题。在用双抗夹心法进行ELISA检测时,检测用的二抗必须特异性针对检测一抗,而不能与捕获抗体起反应。
4. 检测方式:
如今检测ELISA有许多途径,我们可以根据自己的偏好进行选择。一般ELISA检测的是酶促反应的可溶性产物,抗体上结合有相应的酶(例如通常使用的辣根过氧化物酶HRP),而反应体系中添加有相应的底物(如3,3-二氨基联苯胺DAB)。
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