大鼠端粒酶ELISA试剂盒具体操作步骤

大鼠端粒酶ELISA试剂盒具体操作步骤：

1.     根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

2.     加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，生物su标记的抗-IgG抗体，链霉亲和素-HRP，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl，在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl（样品最终稀释度为5倍），盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

3.     配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

4.     洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。

5.     加生物su标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物su标记的抗-IgG抗体50μl（空白孔除外）。37℃温育30分钟

6.     洗涤：操作同4。

7.     加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP（空白孔除外），轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

8.     洗涤：操作同4。

9.     显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.  终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.  测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

12.  计算

13.    以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。