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常见的PCR反应浅析

时间:2024/4/8阅读:142
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常见的PCR反应浅析如下:

1常规PCR

直接PCR是指直接从样品扩增目标DNA,无需进行核酸分离纯化。

2、热启动PCR

热启动PCR常用于增强PCR扩增的特异性。该方法主要利用抗体、亲合配体、适体或化学修饰物等酶修饰酶,来抑制室温下的DNA聚合酶的活性。这种修饰使得在PCR体系配制阶段引物与模板、引物与引物之前的结合能力降低,从而避免了非特异性扩增。

3、巢式PCR

巢式PCR是标准PCR的一种演变,其增强了反应特异性和目标扩增子的产量。

4、快速PCR

在快速PCR中,通过缩减PCR步骤所需时间来完成更快的扩增,且不会影响扩增产量和效率。快速循环条件尤其适用于具有高扩增能力的DNA聚合酶,这类聚合酶在每个结合中可引入更多的核苷酸。

5、高GC含量PCR

具有高GC含量(>65%)的DNA模板由于GC碱基间的强氢键影响,比较难以扩增。富含GC的序列同时也涉及二级结构。因此,富含GC的序列可导致DNA聚合酶沿模板扩增时卡顿"并干扰DNA合成。

6、多重 PCR:

多重PCR可在同一PCR反应管中同时扩增多个不同的片段。多种PCR不仅意味着节省时间、试剂和样品,还能够同时对比多个扩增子

7、长片段 PCR:

长片段PCR通常是指扩增大于5kbDNA片段。长片段PCR传统上使用 Taq DNA 聚合酶(用于快速延伸)和高保真酶(用于提高准确性)的混合物。

8、定量PCR:

序列的扩增程度(得率)取决于模板起始量,PCR常用于对样品中的DNA进行定量,其中,最常见的应用是 基因表达定量。


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