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原代细胞纯化注意细节:
1、 移弃使用过的细胞培养基。
2、使用不包含有钙镁的平衡盐溶ye或EDTA清洗细胞。在培养瓶背着细胞的一面加入清洗溶液,通过转动培养瓶1到2分钟清洗细胞层,然后去除清洗液。
3、加入yi 酶消化,消化细胞与细胞,操作手法,试剂的效价有密切的关系,消化时应注意观察细胞形态,如细胞变得椭圆透亮,并且可以观察到细胞与细胞间的间隙时,轻拍瓶身可以看见成流沙状,即可中止消化,消化时尽量减少对细胞的吹打。
4、当细胞wan全分离时,垂直放置培养瓶,让细胞流到培养瓶的底部。在培养瓶中加入wan全培养基中止消化,计数并再次培养细胞。
5、对于无血清培养基,加入大豆yi 蛋白酶抑制剂。通常使用1∶1(v∶v)0.25 mg/mlyi 蛋白酶抑制剂到yi 蛋白酶中将抑制yi 蛋白酶活性。
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