ELISA检测试剂盒原理与操作步骤方法

ELISA检测试剂盒原理：

1、免疫荧光细胞化学技术
将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量。

2、免疫酶细胞化学技术
是目前免疫组织化学研究中的技术．基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究。

ELISA检测试剂盒操作步骤：

1. 取出试剂盒，室温（20-25℃）放置 30 分钟。

2. 分组：取出 96 孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6 个浓度）、空白孔、待测样品组。

注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。

3. 加样：依照标准品的顺序分别加入 100ul 的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入 100ul 的蒸馏水；其余微孔中加入100ul 的待测样本。

4. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入 50ul 的酶标溶液（空白对照孔除外）。

5. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。

6. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置 15-30s，充分清洗酶标板 5 次，用吸水纸*拍干。

7. 显色：各孔加入显色剂 A 液 50ul 后，再加入显色剂 B 液 50ul。

8. 终止：25-37℃下避光反应 10-15 分钟，加入 50ul 终止液。

9. 读板：在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。