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血液DNAout

时间:2013-6-26阅读:851
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  产品及特点本产品是基于经典离心法的、专门用于从新鲜或冷冻的动物(包括人和禽类)抗凝全血中提取基因组DNA的试剂。具有下列特点:
  
  1.DNA纯净,OD260/OD280在1.8-2.0之间,可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。DNA产量一般在30-50ug/mL全血。
  
  2.操作简单,整个过程约15分钟,室温操作,适合大规模样品处理。
  
  3.一次的血液处理量zui多可达5mL,不需要柱子,不会发生其他同类产品经常发生的堵塞现象。
  
  4.价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格只有其一半左右。
  
  5.安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
  
  规格及成分成份50次
  
  小纸盒包装150次
  
  大纸盒包装
  
  红细胞裂解液(A型)100mL300mL
  
  (250mL+50mL)
  
  溶液A30mL90mL
  
  溶液B15mL45mL
  
  使用手册1份1份
  
  运输及保存运输及保存,有效期一年。
  
  自备试剂、异丙醇、75%乙醇。
  
  使用方法1.在装有抗凝血液的离心管中,按1:1的比例加入红细胞裂解液A型并轻柔颠倒混匀。
  
  2.5000-10000g室温离心2分钟,小心吸弃弃上清。
  
  3.将沉淀重悬于1/2体积(按zui初血液的体积计算)的红细胞裂解液A型中,轻柔吹打混匀后5000-10000g室温离心2分钟。
  
  1.小心弃去上清,沉淀即为去除了红细胞和白细胞胞浆的白细胞细胞核。
  
  2.在白细胞细胞核中加入0.6mL溶液A(溶液A用前需要充分摇匀),用移液枪轻柔吹打混匀(剧烈吹打会打断DNA)。
  
  3.68℃水浴10分钟(此步可省略,但产量略有降低)。
  
  4.加入0.2mL和0.3mL溶液B,立即小心颠倒混匀。
  
  5.室温13000-15000g离心3分钟,小心将上清(约0.7mL)转移至一新的1.5mL塑料离心管中。
  
  6.加入等体积异丙醇(自备),轻柔颠倒混匀5-8次,此时一般会出现絮状DNA沉淀。DNA可以用下列方法之一回收。
  
  7.方法一:可以用枪头将絮状DNA挑出,放在1mL75%乙醇中几十秒使其中的盐离子进入乙醇中,然后再挑出DNA,在空气中放半分钟使乙醇挥发,再转移到0.1-0.3mL自备的TE缓冲液中溶解过夜(大分子的DNA需要长时间才能*溶解)。
  
  8.方法二:室温13000-15000g离心1分钟,去尽上清。在DNA沉淀中加入75%乙醇,震荡后室温13000-15000g离心1分钟,去尽上清(含盐离子)。重复75%乙醇洗涤一次。短暂离心,去尽残留75%乙醇(此步十分重要,不要省略,否则乙醇会影响DNA的溶解和后续的使用),zui后在DNA沉淀中加入0.1-0.3mL自备的TE缓冲液过夜溶解DNA待用。

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