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细胞培养(CellCulture)专题:1、pcDNA3.1+-gD的线性化:pcDNA3.1+使用说明书推荐了以下几个酶作为线性化酶(BglⅡMfeⅡBst1107ⅠEam1105ⅠPvuⅠScaⅠSspⅠ),通过DNAMAN分析gD序列发现其带有MfeⅡ酶切位点。2、转染前一天,在60mm的dish中接种8×105个细胞,加入5ml培养基(含血清,不含抗生素),37℃,5%CO2培养,至转染时要求细胞40%-80%汇合。3、通过分光光度计测定pcDNA3.1+-gD的浓度,用不含血清、抗生素
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蛋白质的分离纯化(一)材料1、选材2、破碎3、混合物的分离(二)粗分级(三)细分级(四)结晶蛋白质的分离方法根据蛋白质的溶解度差异分离—沉淀技术根据蛋白质分子大小的差异分离根据蛋白质的荷电差异分离根据蛋白质与某些物质的吸附差异—吸附分离利用生物分子专一性结合的特性—亲和层析蛋白质的分离方法可逆沉淀:等电点沉淀、盐析法、有机溶剂沉淀不可逆沉淀:热变性沉淀、重金属盐沉淀、有机酸沉淀elisa试剂盒,elisakit,IL-2elisa试剂盒,IL-6elisa试剂盒,IL-10elisa试剂盒,TN
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一、非特异性染色的主要因素组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点:(1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。(2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。(3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如Forssman氏抗原),可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。(4)从组织中难于提纯抗原性物质,所以制备的免疫血清中往往混杂一些抗其他组织成分的抗体,以致容易混淆。(5)抗体分子上标记的荧光素分子太多,这
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伤口愈合是创伤后人体皮肤和表皮组织再生的自然过程。正常来说,皮肤的表皮(zui外层)和(内部或深层)存在于一个平衡的状态,以形成一个保护伤口的屏障。而当焦痂破裂,正常的伤口愈合过程便会迅速地开始。其基本过程包括以下阶段:①止血期、②炎症期、③增生期、④成熟及重塑期。原理当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。应用lWoundhealing
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内参抗体种类很多,比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、LaminB等,那么针对自己的实验,我们该如何选择呢?下面简单介绍下选择内参抗体应遵循的原则:一.样本种属来源:首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。1、哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、LaminB、HistoneH3、Na,Katpase等。2、植物来源实验样本,则可以选择plantactin、Rubisco等。3、其他来源样本研究较少,所以就应该参照文献报导,选择合适
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近日,中科院广州生物医药与健康研究院乔治拉夫课题组高精度解析了癌症相关转录因子SOX18的结构,并利用小片段DNA抑制其作用。相关成果日前在线发表于《核酸研究》。癌症拥有致命特性的原因之一是转移作用,恶性肿瘤细胞从原发部位经淋巴道等途径到达其他部位继续生长,如果抑制了肿瘤细胞的转移,将有可能限制癌细胞的扩散,进而更好地达到治疗癌症的目的。SOX(SRY-relatedHMG-box)家族蛋白SOX18转录因子被证明在胚胎淋巴管生成中起着关键开关作用,如果抑制SOX18转录因子,可在一定程度上降低
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信帆分享:记住这6点,帮你做好免疫组化染色一、为达到免疫组织化学技术的要求,组织固定越新鲜越好。在免疫组化zui后结果的判断时,常可见到均匀一片的似非特异性染色的现象,经多方研究认为,它是一种假性非特异性的染色。因为肿瘤组织中含有的抗原较易发生扩散弥散,肿瘤细胞无限制的生长和生长过速,导致肿瘤中间部分组织血液供给困难,造成缺血坏死,坏死细胞中的抗原由于机体的作用,可以被均匀地散布于细胞与细胞间的间质,这是抗原发生弥散的一种方式。另一种抗原弥散的方式就是,由于组织没有及时的固定所引起的。离体的组织
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