关于ELISA试剂盒双抗体夹心法

      在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，

     在一步法测定中，这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，ELISA试剂盒经第二次孵育后，酶结合物就会与*次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，ELISA试剂盒只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，间接法也称夹心法，是直接法的简单改进，将酶示踪物标记在二抗上，再与*抗体（已与相应抗原反应形成复合物的IgG）反应，然后进行显色反应。此法要求第二抗体与特异性抗体（一抗）应是不同种属的动物产生，如特异性抗体（一抗）是兔抗人IgG，酶标记抗体（二抗）则可以是羊抗兔抗体。

操作步骤如下：

1, 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。

2, 加受检标本，保温反应。ELISA试剂盒标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

3, 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。

4, 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。