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双向免疫扩散及免疫电泳

时间:2011-9-26阅读:2173
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将可溶性抗原(如小牛血清)与相应抗体(如兔抗小牛血清的抗体)混合,当两者比例合适并有电解质(如氯化钠、磷酸盐等)存在时,即有抗原―抗体复合物的沉淀出现,此为沉淀反应(precipitin reaction)。如以琼脂凝胶为支持介质,则在凝胶中出现可见的沉淀线、沉淀弧或沉淀峰。根据沉淀出现与否及沉淀量的多寡,可定性、定量地检测出样品中抗原或抗体的存在及含量。免疫学的一些测定方法即基于此特性。
双向扩散法(double diffusion),zui早由Ouchterlony创立,故又称Ouchterlony法。此法是利用琼脂凝胶为介质的一种沉淀反应。琼脂凝胶是多孔的网状结构,大分子物质可以自由通过,这种分子的扩散作用使分别两处的抗原和相应抗体相遇,形成抗原―抗体复合物,比例合适时出现沉淀。由于凝胶透明度高,可直接观察到复合物的沉淀线(弧)。沉淀线(弧)的特征与位置取决于抗原相对分子质量的大小、分子结构、扩散系数和浓度等因素。当抗原、抗体存在多种系统时,会出现多条沉淀线(弧)。依据沉淀线(弧)可以定性抗原。此法操作简便、灵敏度高,是zui为常用的免疫学测定抗原和测定抗血清效价的方法。
免疫电泳法(immunoelectrophoresis是在凝胶介质中将电泳法与扩散法相结合的一种免疫化学方法,用以研究抗原和抗体。免疫电泳是使血清在琼脂或琼脂糖中进行的电泳。在一定电场强度下,由于血清中各种免疫球蛋白的分子大小以及荷电状态和荷电量均有差异,因而它们的泳动速率也各不相同,加上电泳过程中电渗作用的影响,使各自组分得到分离。
在一定电场强度下,抗原与相应抗体在琼脂介质中加速扩散相遇而形成复合物沉淀,这种检测方法称作电免疫扩散法(electroimmunodiffusion)。由于操作方法不同,电免疫扩散法可分为对流免疫电泳(countercurrent immunoelectrophoresis),交叉免疫电泳(crossed immunoelectrophoresis)和火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis)。

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