15000017673
当前位置：上海邦景实业有限公司>>细胞试剂>>细胞凋亡与增殖>> AO-EB双染色试剂盒
| 货号 | BJ-01X6539 |
|---|
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二． 细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
中文名称：AO-EB双染色试剂盒
英文名称：Acridine Orange(AO)/EB Double Stain Kit
产品规格：50ml*2|250ml*2
产品货号：BJ-01X6539
橙能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，与双链DNA结合后发出绿色荧光，溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。二者很容易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构。本产品AO、EB 溶液浓度分别为100ug/ml，所含稳定剂不影响实验效果。 使用方法：（仅供参考） 1、使用前先根据用量，将AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液，现用现配。 2.1、对于贴壁细胞或爬片，去掉培养基，用 PBS 洗两遍去除残余培养基和未贴壁细胞，加入新的 PBS；如果需要观察全部细胞特性，保留未贴壁细胞，可以直接在培养基中加入工作液。按照每毫升培养基或 PBS 中加入 20ul 工作液即可。室温放置 2-5min 后，用 PBS 洗 2 次，除去残余的荧光染料。加入新的 PBS 或培养基于荧光显微镜下观察即可。 2.2、对于悬浮细胞，可直接加入工作液或离心收集细胞后在 PBS 中加入工作液。按照每毫升培养基或 PBS 中加入 20ul 工作液即可。室温放置 2-5min 后，离心去除工作液，后用 PBS 洗 2 次，除去残余的荧光染料。加入新的 PBS 或培养基于荧光显微镜下观察即可。 3、建议用蓝光激发，视野下可以观察到死细胞呈现红色，活细胞呈现绿色。 保存：4℃避光密封保存，有效期一年。 |
细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
Spodoptera litura Nucleopolyhedrovirus（SlNPV）斜纹夜蛾核型多角体病毒LAMP试剂盒 种源性检测 50次 低温 负20度 一年 3-4周
Streptococcus iniae海豚链球LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Histophilus somni睡眠嗜组织探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
螺源性成分LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Ureaplasma urealyticum解脲支原体探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Rhizoma dioscoreae山药LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Radix ephedrae麻黄根PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Rabies Virus(RV、street virus)狂犬病病毒街毒株探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Radix gentianae macrophyllae秦艽LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Radix ephedrae麻黄根染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
Trichophyton mentagrophytes须毛癣LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周
Herba moslae香薷探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周
AO-EB双染色试剂盒人磷脂A2(PL-A2)免疫试剂盒*直销
OGY琼脂 英文名称：OGY Agar 产品规格：250g
人基质金属蛋白抑制因子2(TIMP-2)免疫试剂盒进口、组装
琼脂培养基J 英文名称：Agar medium J (Deoxycholate citrate agar) 产品规格：250g
人成纤维细胞生长因子23(FGF-23)免疫试剂盒进口、分装
香素 ： 91-64-5 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
人CD44分子(CD44)免疫试剂盒现货供应
小鼠组织蛋白去乙酰化2(Hdac2/Yy1bp)免疫试剂盒*直销
牛内皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫试剂盒进口、分装
小鼠抗胰蛋白(AT)免疫试剂盒进口、组装
鸡白介素10(IL-10)免疫试剂盒现货供应
请输入账号
请输入密码
请输验证码
以上信息由企业自行提供，信息内容的真实性、准确性和合法性由相关企业负责，智慧城市网对此不承担任何保证责任。
温馨提示：为规避购买风险，建议您在购买产品前务必确认供应商资质及产品质量。
智慧城市网