精氨酸-琼脂糖凝胶4B使用说明书

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【精氨酸-琼脂糖凝胶4B参数说明】

中文名：精氨酸-琼脂糖凝胶4B

英文名：Arginine Sepharose 4B

供应商：上海远慕

级别：BR

配基：精氨酸配基

密度：20-40μmol/ml亲和填料

颗粒大小：45-165μm

zui大流速：300cm/hpH

范围：3-10，在位清洗时pH范围可到2-13

使用温度：4℃~常温性状

化学性质：含20%乙醇，底部为乳白色胶体

用途：精氨酸是碱性氨基酸，把它偶联到活化的填料上能用于丝氨酸蛋白酶，凝血因子，血纤维蛋白溶酶原，血纤维蛋白溶酶原激活剂等的亲和纯化

保存：2～8℃

【精氨酸-琼脂糖凝胶4B操作步骤】

1、装柱

凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。

以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。

让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。

选择一根一定直径的柱子，长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的1.15倍)，清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液(按凝胶：缓冲液=3：1的比例)配成匀浆。不要剧烈搅动，以免搅坏微球。

将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜)，务必使底端无气泡。

用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

打开蠕动泵，让缓冲液缓慢流过，使柱床稳定。

用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。

2、平衡

让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

3、上样

样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。

介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。

上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离越好。

4、洗脱

用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

5、再生

一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。

6、注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。

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