辛基-琼脂糖凝胶 H.P. 使用说明书

辛基-琼脂糖凝胶 H.P.使用说明书由上海远慕提供介绍，本司现货供应的琼脂糖凝胶包含：丁基-琼脂糖凝胶 4FF，苯基-琼脂糖凝胶 H.P.，苯基-琼脂糖凝胶 CL-4B，苯基-琼脂糖凝胶 6FF，羧甲基-琼脂糖凝胶 CL-6B，DEAE-琼脂糖凝胶 CL-6B，更多产品请！

辛基-琼脂糖凝胶 H.P.参数说明

中文名：辛基-琼脂糖凝胶 H.P. 

英文名：octyl -Sepharose H.P.

供应商：上海远慕

规格：25ml、100ml、500ml

性状：白色微球

凝胶类型：疏水层析介质

粒径： 45-165µm

工作PH值：3-13

应用：疏水层析介质，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。

辛基-琼脂糖凝胶 H.P. 

辛基-琼脂糖凝胶 H.P.分离技巧

1、分离时流速不可太快，切切不可心急，所谓欲速则不达;接馏分时可开全速，节省时间。

2、柱子尽可能长，葡聚糖凝胶柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。

3、馏分一定要接的细，可1/10，或1/20 个保留体积接成一馏分。

4、洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。

5、鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质

6、葡聚糖凝胶对黄酮类成分的分离效果，方法很成型，有大量文献参考。

7、填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用。暂时不用试可以水洗→含水醇洗(醇的浓度逐步递增)→醇洗，zui后泡在醇中贮于磨口瓶中备用。如长期不用时，可在以上处理基础上，减压抽干，再用少量乙迷洗净抽干，室温充分挥散至无醚味后，60～80°C干燥后保存。

辛基-琼脂糖凝胶 H.P.使用方法

1.装柱：

a、让所有的材料和试剂达到室温；配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。

b、根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液(按凝胶：缓冲液=3：1的比例)配成匀浆。

c、将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜)，务必使底端无气泡。

d、用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡；打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

e、打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定；用2~3柱体积的缓冲液平衡柱子。

2.平衡：

让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变；平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3.上样：

a、样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。

b、一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

c、介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度；盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强，介质对组分吸附牢。

4.洗脱：

疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱；加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱；zui常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

5.再生：

一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用；若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。

6.在位清洗：

a、对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2MNacl去除。

b、对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1MNaOH去除。

c、对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡；清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

7.去热源：

用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时；或用以下方法步骤去除：

a、2倍柱体积的70%乙醇；

b、2倍柱体积50mMTris-HclpH7.5；

c、1倍柱体积4M尿素；

d、3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1MNaCl；上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

8.消毒：

用0.5~1MNaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

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