琼脂糖凝胶CL-2B实验流程

琼脂糖凝胶CL-2B是在琼脂糖凝胶2B的基础上通过交联使微球的刚性增强，理化性能提高，有利用于工业生产。该介质用于生物大分子的凝胶层析。本品呈白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

琼脂糖凝胶CL-2B参数说明：

中文名：琼脂糖凝胶CL-2B

英文名：Sepharose CL-2B

供应商：上海远慕

规格：100ml,500ml

分离范围：70,000～40 ×106

应用：蛋白、大分子复合物、病毒、核酸、多糖的分离、分子量测定

琼脂糖凝胶CL-2B

琼脂糖凝胶CL-2B实验流程：

1、装柱凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。

a、让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。

b、选择一根一定直径的柱子，长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的1.15倍)，清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液(按凝胶：缓冲液=3：1的比例)配成匀浆。

c、将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜)，务必使底端无气泡。

d、用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

e、打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子，到柱床稳定。

f、用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。

2、平衡让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

3、上样

a、样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。

b、介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。

c、上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离越好。

4、洗脱用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

5、再生一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。

6、在位清洗

a、对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2MNacl去除。

b、对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1MNaOH去除。

c、对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

7、注意在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

8、去热源用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：a、2倍柱体积的70%乙醇;b、2倍柱体积50mMTris-HClpH7.5;c、1倍柱体积4M尿素;e、3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1MNacl;以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

9、消毒用0.5~1MNaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

琼脂糖凝胶CL-2B注意事项：

1、产品应密封贮存在4℃~25℃(保存溶液为20%乙醇)，通风、干燥、清洁的地方。

2、不能冷冻。

3、用过的柱子贮存在4℃(20%乙醇)。

4、本产品避免与氧化剂接触;避免长时间暴露在空气中。

5、保质期：5年。

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