琼脂糖凝胶6B说明书

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琼脂糖凝胶6B参数说明：

中文名：琼脂糖凝胶6B

英文名：Sepharose 6B

供应商：上海远慕

基质：6%高度交联琼脂糖凝胶

规格：5g

操作温度：4-40℃

zui大流速：300cm/h

性状：白色胶体

保存温度：4-8℃

琼脂糖凝胶6B分离范围：10,000-4 ×106

类型：凝胶过滤填料,凝胶层析介质

用途：亲和层析介质

应用：蛋白、多肽、多糖的分离、分子量测定等

琼脂糖凝胶6B

琼脂糖凝胶6B操作步骤：

　该环氧活化琼脂糖凝胶介质可以和含有氨基、巯基或羟基的亲和配基的蛋白质、多肽、糖等物质偶联。具体的偶联方法如下(偶联BSA为例)：

洗涤：用10-20倍胶体积的去离子水冲洗保存存储液中的环氧活化胶，除去存储液，抽干;

偶联：称取200mg BSA，溶于10ml 0.1M pH 9.0碳酸钠缓冲液，加入到洗涤抽干的活化胶中，在37℃摇床上振荡12-24h偶联，偶联完毕后将料液转移到砂芯漏斗中抽干;

封闭：将抽干的偶联BSA的胶加入到100 ml三角瓶中，加入30 ml 1 mol/L乙醇胺溶液。搅拌速度120 rpm，37 ℃条件下反应4h，然后将料液转移到砂芯漏斗中抽干。

清洗：然后依次用5倍的去离子水、0.1 M含0.5M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)、去离子水、0.1M含0.5M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液(pH 8.0)和去离子水充分洗涤后，抽干。

保存：保存于4℃、20%乙醇溶液中。

琼脂糖凝胶6B注意事项：

1、不同配基的偶联方法与上面类似，但是反应的条件例如：配基加入量，反应时间，反应温度应根据配基的不同进行适当的调整;

2、可用碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液做为偶联缓冲液，但不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸的缓冲液。

琼脂糖凝胶6B分离技巧:

1、分离时流速不可太快，切切不可心急，所谓欲速则不达;接馏分时可开全速，节省时间。

2、柱子尽可能长，葡聚糖凝胶柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。

3、馏分一定要接的细，可1/10，或1/20 个保留体积接成一馏分。

4、洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。

5、鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质

6、葡聚糖凝胶对黄酮类成分的分离效果，方法很成型，有大量文献参考。

7、填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用。暂时不用试可以水洗→含水醇洗(醇的浓度逐步递增)→醇洗，zui后泡在醇中贮于磨口瓶中备用。如长期不用时，可在以上处理基础上，减压抽干，再用少量乙迷洗净抽干，室温充分挥散至无醚味后，60～80°C干燥后保存。

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