细胞增殖-毒性检测试剂盒使用说明书

细胞增殖-毒性检测试剂盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

产品简介：

CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞増殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物。在电了耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下。可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan)。细胞増殖越多越快，则颜色越深：细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞.颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

使用方法：

1、 在96孔板中接种细胞悬液(100ul/孔).通常细胞增值实验每孔约2000个细胞.细胞毒性实验每孔约5000个细胞.具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞増殖速度的快慢等因素决定。

2、 按照实验需要.进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理一段适当的时间(例如: 6.12.24 或48 小时)。

3、 每扎加入1Oul CCK-8溶液。如果起始的培养体枳为200ul，刻需加入2Oul CCK-8溶液，以此类推。可以用加相应量的细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照,若担 心所使用的药物会干扰检测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液，但不加细胞的孔作为空口对照。

4、 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间而以通过预实验确定.預实验时可以在 0.5、 1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

5、 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值，若无450nm滤光片.可以使用420-480nm的 滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作 为参考波长进行双波长测定。

6、 如果浴要哲时不测定OD值，可以向每孔中加入lOul0.1M HCL溶液或者1% W/V的 SDS溶液，避光保存在室溫，24小时内吸光度不会发生变化。

实验结果分析：
细胞活力=[0D（加药）-0D（空白）]/ [OD（0加药）-0D（空白）]x100% 
抑制率=[OD（0加药）-OD（加药）]/ [OD（0加药）-OD（空白）]x100%
 OD（加药）：具有细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光值
 OD（空白）：具有培养基、CCK-8溶液，没有细胞的孔的吸光值
OD（0加药）：具有细胞、培养基、CCK-8溶液，没有药物溶液的孔的吸光值
注意事项：
1、使用96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，请注意蒸发问题。可将96孔板外围一圈加培养基、水或PBS保湿。同时，可以把96孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发。
2、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前，建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK-8试剂后的培养时间。
3、铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀，建议铺板过程中注意时常混匀，防止因细胞沉淀造成不均匀。加入CCK-8后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基和CCK-8溶液充分混匀。
4、本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待测物质有氧化性或还原性，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
5、加入CCK-8时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色或pH值已变化，建议换用新鲜的培养基。
6、用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
7、本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中，请在生物安全柜内无菌操作，避免污染。
8、为了您的健康和安全，请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作。
保存方法：
0-5℃避光保存，长期保存建议-20℃，但不能反复冻融。
0-5℃条件下可保存一年。