【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 犬肾细胞;MDCK/IgR培养
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法
传代情况
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A类
产品名称 | 犬肾细胞;MDCK/IgR培养 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
人GDP解离抑制因2(GdI2)免疫试剂盒 Human GdI2 ELISA kit
人GAD/IA2自身抗体免疫试剂盒 Human GAD/IA2 combined autoantibody ELISA kit
人G1/S特异性细胞周期蛋白E1(CCNE1)免疫试剂盒 Human CCNE1 ELISA kit
人F-肌动蛋白(F-actin)免疫试剂盒 Human F-actin ELISA Kit
人FOS 样抗原2(FOSL2)免疫试剂盒 Human FOSL2 ELISA Kit
人FMS样*激酶3配体(Flt-3L)免疫试剂盒 Human FMS-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt-3L ELISA Kit
人FMS样*激酶3(Flt3)免疫试剂盒 Human FMS-like tyrosine kinase 3,Flt3 ELISA Kit
人Fc受体样蛋白3(FCRL3)免疫试剂盒 Human FCRL3 ELISA kit
人FAM172A蛋白(FAM172A)免疫试剂盒 Human Protein FAM172A(FAM172A) ELISA kit
人E选择素(E-Selectin/CD62E)免疫试剂盒 Human E-Selectin ELISA kit
人E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)免疫试剂盒 Human E-Cad ELISA Kit*基硅烷基三氟磺酸酯 Trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate 27607-77-8
异氰酸*基硅酯 TRIMETHYLSILYL ISOCYANATE 1118-02-1
*基乙醛 Trimethylacetaldehyde 630-19-3
三聚甲醛 s-Trioxane 110-88-3
1,2,3-三氯丙烷 1,2,3-Trichloropropane;Glycerol trichlorohydrin 96-18-4
三氯化钛溶液 Titanous chloride 7705/7/9
三氯 Benzotrichloride 1998/7/7
三十七烷 N-HEPTATRIACONTANE 7194-84-5
亚甲基蓝 Methylene Blue trihydrate 7220-79-3
四甘醇 Bis[2-(2-hydroxyethoxy)ethyl] ether 112-60-7
三糖铁琼脂培养基(TSI) NA
甲基三辛基氯化铵;三辛基甲基氯化铵 MethyltrioctylaMMoniuM chloride 5137-55-3