人肺转化细胞；AE1201培养

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称  人肺转化细胞；AE1201培养
形态特性   成纤维细胞样
生长特性  贴壁生长
特征特性   该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。 
培养条件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
传代方法   1:3传代，3-4天传1次
传代情况  C6
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  阴性
STR  
同工酶  
染色体  
使用权限  未定

复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
(DC-SIGN/CD209)ELISA Kit  大鼠树突状细胞表面特异C型凝集素-细胞间黏附分子3结合非整合素分子    Multi-class antibodies    规格：     48T
(P I NP)ELISA Kit  大鼠Ⅰ型前胶原N端前肽    Multi-class antibodies    规格：     48T
(ADAM9)ELISA Kit  大鼠解整合素样金属蛋白酶9    Multi-class antibodies    规格：     48T
大鼠c-fos ELISA Kit  大鼠c-fos    Multi-class antibodies    规格：     48T
大鼠c-jun ELISA Kit   大鼠c-jun ELISA Kit    Multi-class antibodies    规格：     48T
sIL-6R ELISA Kit  大鼠可溶白介素6受体    Multi-class antibodies    规格：     48T
PYD ELISA Kit  大鼠吡啶酚    Multi-class antibodies    规格：     48T
BACE2 ELISA Kit  大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶2    Multi-class antibodies    规格：     48T
BALP ELISA Kit  大鼠骨碱磷酸酶    Multi-class antibodies    规格：     48T
IL-32 ELISA Kit  大鼠白介素32    Multi-class antibodies    规格：     48T
PROGR ELISA kit   大鼠孕酮受体    Multi-class antibodies    规格：     48THABP2    英文名称：    透明质酸结合蛋白2抗体    ?0.1ml
HAPLN2    英文名称：    透明质酸及粘蛋白2抗体    ?0.2ml
HAS3    英文名称：    透明质酸合成酶3抗体    ?0.2ml
FKBP52    英文名称：    热休克蛋白56抗体    ?0.2ml
HSPABP/HIP/HSC70 Interacting Protein HIP    英文名称：    热休克蛋白70相互作用蛋白抗体    ?0.2ml
DNAJA1    英文名称：    热休克蛋白相关蛋白4抗体    ?0.2ml
HAS2    英文名称：    透明质酸合成酶2抗体    ?0.1ml
HOXA3    英文名称：    同源盒基因HOXA3蛋白抗体    ?0.1ml
HOXA4    英文名称：    同源盒基因HOXA4蛋白抗体    ?0.1ml
HOXA6    英文名称：    同源盒基因HOXA6蛋白抗体    ?0.1ml
HOXA7    英文名称：    同源盒基因HOXA7蛋白抗体    ?0.1ml
HSD17B4    英文名称：    羟基类固醇(17β)脱氢酶4/17β-HSD4抗体    ?0.1ml
HBZ    英文名称：    血红蛋白ζ链/Hemoglobin ζ 抗体    ?0.2ml