血管平滑肌细胞;T/G HA-VSMC复苏来源可靠(源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等),活力>95%,贴壁性好。我们从试剂、包被器皿、冻存原代细胞、新鲜原代细胞、原代细胞的分子学实验等提供全程服务。我司拥有专业的实验室,可无菌操作并提供相关科研项目解决方案以及实验服务。
细胞名称 血管平滑肌细胞;T/G HA-VSMC复苏
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 T/G HA-VSMC细胞建系于1992年(Tilberg A F,et al)。该细胞系属有限细胞系,可因连续传代而衰老死亡。连续传代试验显示,T/G HA-VSMC细胞经历15-20个群体倍增时间就会衰老死亡,固需控制有限的传代次数。
培养条件 F12K 10%FBS;加多种生长因子,详见参考文献
传代方法 1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C15
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR STR鉴定
同工酶
染色体
使用权限 A类
产品名称 | 生长特性 | 发货地 | 货期 |
贴壁生长 | 上海 | 3-5天 |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量*,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量*,使*的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去*,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止*作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
Ig-j(Human immunoglubin joining chain) ELISA Kit *j链 Multi-class antibodies 规格: 48T
HB- Beta(Human Beta-subunits of hemoglobin) ELISA Kit 人血红蛋白β亚基 Multi-class antibodies 规格: 48T
SIgA(Human secretory immunoglobulin A) ELISA Kit 人分泌型免疫球蛋白A Multi-class antibodies 规格: 48T
SIgA(Human secretory immunoglobulin A) ELISA Kit 人分泌型免疫球蛋白A(人唾液) Multi-class antibodies 规格: 96T
F XII a(Human activated coagulation factor XII ) ELISA Kit 人活化*Ⅻ Multi-class antibodies 规格: 48T
Human Free Protein S,FP-S ELISA Kit 人游离蛋白S Multi-class antibodies 规格: 48T
APT(Human Abnormal prothrombin) ELISA Kit 人异常*原 Multi-class antibodies 规格: 48T
CIC(Human circulating immune complex) ELISA Kit 人循环免疫复合物 Multi-class antibodies 规格: 48T
PA-IgM(Human Plaet associated antibody) ELISA Kit 人血小板相关抗体IgM Multi-class antibodies 规格: 48T
FPA(Human fibrinopeptide A) ELISA Kit 人血纤肽/纤维蛋白肽A Multi-class antibodies 规格: 48T
Plg(Human Plasminogen) ELISA Kit 人纤溶酶原 Multi-class antibodies 规格: 48TGLI4 英文名称: 转录因子Gli4/锌指蛋白gli4抗体 ?0.2ml
Gliadin 英文名称: 麦角蛋白抗体 ?0.2ml
GLIPR1L1 英文名称: 胶质瘤发病相关蛋白1抗体 ?0.2ml
GLT25D1 英文名称: 糖基转移酶25结构域1/前胶原半乳糖基转移酶1抗体 ?0.2ml
GLS2 英文名称: *酰胺水解酶抗体 ?0.2ml
GLT25D2 英文名称: 糖基转移酶25结构域2/前胶原半乳糖基转移酶2抗体 ?0.2ml
GLT28D1 英文名称: 糖基转移酶28家族1抗体 ?0.2ml
GLT6D1 英文名称: 糖基转移酶6结构1抗体 ?0.2ml
GLTSCR2 英文名称: 胶质瘤抑癌候选基因2抗体 ?0.2ml
Phospho-Glucocorticoid Receptor (Ser226) 英文名称: 磷酸化糖皮质激素受体抗体 ?0.1ml
GLUT6 英文名称: 葡萄糖转运蛋白6抗体 ?0.2ml
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