真菌种属鉴定 PCR Mix 4100 次原理合成建文库用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意：随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然 后再转移到 42℃保温 60 分钟）。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
真菌种属鉴定 PCR Mix 4100 次原理按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含标记 dNTP，本试剂不提供）。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟（但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上，电泳一般能出现 1.1Kb 的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提 供）。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
〖保存〗：RT
百里酚
〖英文名称〗：Thymol；2-Isopropyl-5-methylphenol；Thyme camphor；3-p-Cymenol；4-Isopropyl-m-cresol；Thymic acid
〖其他名称〗：百里香酚；*；麝香草脑；5-甲基-2-异丙基酚；6-异丙基-3-甲基酚；2-异丙基-5-甲基*；3-羟基对异丙基甲苯
〖CAS号〗：89-83-8
C10H14O=150.22
〖级别〗：AR
〖含量〗：≥98.0%
结晶点：47～50℃
酸〖碱度〗试验：合格
酚：合格
碳氢化物：合格
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗：无色半透明结晶。有特殊气味，微有碱味。能随水蒸气挥发。能溶于醇、醚、氯方、二硫化碳、冰醋酸和碱溶液，微溶于水。25℃时,1g溶于1ml乙醇、1.5ml乙迷、0.7ml氯方、1.7ml橄榄油、约1000ml水中。密度0.96
DNA 磷酸化试剂盒 *溶液 ,50mg/mL
Taq 酶抗体 盐酸*
Taq 酶抗体 盐酸*溶液 ,50mg/mL
Real-Time PCR 稀释液 盐酸*
ROX 参考染料 洋红
链霉亲和素，HRP 标记 核糖核苷复合物 (RVC),0.2M
Bouin 固定液 *
阿尔玛蓝细胞增殖与细胞毒检测试剂 液体样品 DNAout
阿尔玛蓝细胞增殖与细胞毒检测试剂 液体样品 RNAout
* 液体样品 RNAout
多点突变试剂盒 液体样品蛋白纯化回收试剂盒
冷启动核酸酶 液相 RNase 清除剂
cDNA 文库构建试剂盒 液相内毒素清除剂
白质非变性 PAGE 套装
