即用型热启动 PCR 试剂盒1.5mL原理产品及特点:
本试剂盒提供合成 cDNA *链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全长 cDNA 拷贝。
1. 使用突变的反转录酶,内源 RNase H 活性低。
2. zui长可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提 供)。
4. 总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。
5. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。
即用型热启动 PCR 试剂盒1.5mL原理产品介绍:
合成建文库用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反应体系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或专一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 样品不能含有基因组 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板专一性引物 100 pmol 注意:随机引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。 RNase-free 水 补水到 13 uL 2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 温 5 分钟。如果使用随机引物,则改成 25℃ 5 分钟)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然 后再转移到 42℃保温 60 分钟)。此步为 RT 反应。
7. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反应体系:
对照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或随机引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或对照引物 2 uL
RNase-free 水 补水到 13 uL
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含标记 dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆转录酶(含 RI),反应终体积为 20uL。
6. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟,然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 电泳检测。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 总量的 50%以上,电泳一般能出现 1.1Kb 的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。
C27H31N2O7S2 · 0.5Ca=579.71
〖级别〗:AR
〖含量〗:≥85.0%
〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:暗红青莲色或深蓝紫色粉末或颗粒。易溶于水呈蓝色,微溶于乙醇呈蓝绿色。遇浓硫酸显棕橄榄黄色,稀释显深黄至绿色。水溶液加氢氧不变色,加热则呈深紫色
〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)酸碱指示剂,pH 0.8(黄)~3.0(蓝)。氧化还原指示剂(黄绿色~橙色)。螺旋体和活体染色
〖保存〗:RT
硫酸奎宁二水物
〖英文名称〗:Quinine hemisulfate salt dihydrate
〖其他名称〗:(8S,9R)-6'-甲氧基金鸡纳-9-醇〖硫酸盐〗二水物;奎宁〖硫酸盐〗二水物;奎宁硫酸酯二水物;硫酸金鸡纳盐二水物
〖CAS号〗:6119-70-6
C40H48N4O4·H2O4S·2H2O=782.96
〖级别〗:BR
〖含量〗:≥98%
〖干燥失重〗:≤5.0%
PH:5DNA 电泳分子量标准 (3)φX174 DNA/Hinc Ⅱ 无内毒素萤火虫荧光素
随机引物法 DNA 探针标记试剂盒 Sephacryl S-400 基质
随机引物法 DNA 探针*标记试剂盒 链霉亲和素
随机引物法 DNA 探针标记试剂盒 链霉亲和素,AP 标记
PCR 法 DNA 探针标记试剂盒 DNA Triton
PCR 法 DNA 探针*标记试剂盒 DNA Tween 20
PCR 法 DNA 探针标记试剂盒 *,测序
TdT 加尾法 DNA 标记试剂盒 弹性蛋白酶
TdT 加尾法 DNA *标记试剂盒 *
TdT 加尾法 DNA 标记试剂盒 嗜热菌蛋白酶
柱式 BAC DNAout *,质谱
DTT,蛋白