Kovacs 氏靛基质试剂特殊培养法
二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为:
1.吸除旧培养液注入另瓶中。
2.用温BSS冲洗1次。
3.用0.25%温*消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。
4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按2:1新旧混合)。
5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。
6.按一分为二比例接种培养。
使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法:
1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞,90%汇合时制成细胞悬液,再按105细胞/毫升重新接种培养。
2.在细胞半汇合时,准备0.25μg/ml的丝裂霉素C,按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜;或用射线单次照射,剂量30~50戈瑞。
3.细胞经上述处理后,Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时,*消化细胞制成悬液,按5×104(104细胞/cm2)接种入新Kovacs 氏靛基质试剂中。
4.48小时后,即可用于细胞克隆之用。
Kovacs 氏靛基质试剂细胞分离(克隆)培养
多孔塑料培养板单细胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆细胞,吸出瓶内培养液,加消化液。
2.低密度细胞悬液的制备:做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液,然后稀释细胞,使之成为1~2细胞/毫升悬液,zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。
3.接种:先用吸管轻轻吹打细胞悬液,使混悬均匀,继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确,争取在zui短时间内加完,以免培养液蒸发,然后迅速盖好盖板,置CO2温箱培养。
4.标记:培养6~12小时后,待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后,从温箱中取出,置倒置光显微镜台上,观察和标记下含有单个细胞的孔,置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液,只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基,但不要吸除过多,余少许,以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液,继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时,可进行分离培养。
5.分离扩大培养:培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔,先吸除旧培养液,用Hanks洗1~2次,继加*少许,加入量已能覆盖细胞群即可,如过多,应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视,待发现细胞变圆时,加入0.1ml含10%血清的克隆培养基,用吸管轻轻吹打,当细胞离开底物悬浮后,一并吸入管内,移入另瓶或皿中,再补加一定量克隆培养液,置CO2温箱中继续培养、增殖,使之形成新的细胞群后,即转用常规培养法培养。
Kovacs 氏靛基质试剂相关产品如下:hz0225 人乳腺癌细胞 MDA-MB-231
hz0226 人乳腺癌细胞 MDA-MB-453
hz0227 人乳腺癌细胞 MDA-MB-468
hz0228 人乳腺癌细胞 ZR-75-1
hz0229 人乳腺癌细胞 ZR-75-30
hz0230 人乳腺导管癌 MDA-MB-435S
hz0231 人乳腺导管癌细胞 BT-474 [BT474]
hz0232 人乳腺管癌细胞 BT-549
hz0233 人乳腺管癌细胞 T-47D
hz0234 人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞 CCD-1095Sk
hz0235 人乳腺腺癌细胞 SK-BR-3
hz0236 人胚肺成纤维细胞 HFL-I
hz0237 人肺成纤维细胞 HFL1
hz0238 人胚肺成纤维细胞 MRC-5
hz0239 人胚肺成纤维细胞 WI-38
hz0240 人正常肺上皮细胞 BEAS-2B
hz0241 人退行性癌细胞 Calu-6
hz0242 人非小细胞肺癌细胞 A549
hz0243 人非小细胞肺癌细胞 NCI-H358
hz0244 人非小细胞肺癌细胞 NCI-H1650
hz0245 人非小细胞肺癌细胞 HCC827
hz0246 人经典小细胞肺癌细胞 NCI-H1688
hz0247 人肺癌细胞(淋巴结转移) NCI-H292
hz0248 人肺癌细胞株 MSTO-211H
hz0249 人肺扁平上皮癌细胞 QG-56
hz0250 人肺鳞癌细胞 SK-MES-1
hz0251 人肺腺癌细胞 LTEP-a-2
hz0252 人肺腺癌细胞 SPC-A-1
hz0253 人肺腺癌 (胸水) Calu-3