Slantz and Bartley 培养基特殊培养法
二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为:
1.吸除旧培养液注入另瓶中。
2.用温BSS冲洗1次。
3.用0.25%温*消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。
4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按2:1新旧混合)。
5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。
6.按一分为二比例接种培养。
使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法:
1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞,90%汇合时制成细胞悬液,再按105细胞/毫升重新接种培养。
2.在细胞半汇合时,准备0.25μg/ml的丝裂霉素C,按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜;或用射线单次照射,剂量30~50戈瑞。
3.细胞经上述处理后,Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时,*消化细胞制成悬液,按5×104(104细胞/cm2)接种入新Slantz and Bartley 培养基中。
4.48小时后,即可用于细胞克隆之用。
Slantz and Bartley 培养基细胞分离(克隆)培养
多孔塑料培养板单细胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆细胞,吸出瓶内培养液,加消化液。
2.低密度细胞悬液的制备:做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液,然后稀释细胞,使之成为1~2细胞/毫升悬液,zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。
3.接种:先用吸管轻轻吹打细胞悬液,使混悬均匀,继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确,争取在zui短时间内加完,以免培养液蒸发,然后迅速盖好盖板,置CO2温箱培养。
4.标记:培养6~12小时后,待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后,从温箱中取出,置倒置光显微镜台上,观察和标记下含有单个细胞的孔,置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液,只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基,但不要吸除过多,余少许,以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液,继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时,可进行分离培养。
5.分离扩大培养:培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔,先吸除旧培养液,用Hanks洗1~2次,继加*少许,加入量已能覆盖细胞群即可,如过多,应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视,待发现细胞变圆时,加入0.1ml含10%血清的克隆培养基,用吸管轻轻吹打,当细胞离开底物悬浮后,一并吸入管内,移入另瓶或皿中,再补加一定量克隆培养液,置CO2温箱中继续培养、增殖,使之形成新的细胞群后,即转用常规培养法培养。
Slantz and Bartley 培养基相关产品如下:hz0004 仓鼠卵巢细胞 CHO
hz0005 仓鼠肺细胞 R 1610
hz0006 仓鼠卵巢细胞,二氢*还原酶缺陷 CHO/dhFr-
hz0007 仓鼠卵巢细胞亚株 CHO-K1
hz0008 仓鼠卵巢细胞 Lec1
hz0009 中国仓鼠卵巢细胞 CTLA4 Ig-24
hz0010 长尾绿猴胚胎细胞 4179
hz0011 长尾绿猴肾细胞 4647
hz0012 大鼠胸大动脉平滑肌细胞 A7r5
hz0013 大鼠成肌细胞 L6
hz0014 大鼠肺泡巨噬细胞 NR8383
hz0015 大鼠心肌细胞 H9c2(2-1)
hz0016 大鼠肝癌细胞 CBRH-7919
hz0017 大鼠肝癌细胞 RH-35
hz0018 大鼠肝细胞 BRL
hz0019 大鼠肝细胞 BRL 3A
hz0020 大鼠胰腺外分泌细胞 AR42J
hz0021 大鼠胶质瘤细胞 C6
hz0022 大鼠乳腺癌细胞 SHZ-88
hz0023 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化) PC-12
hz0024 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化) PC-12
hz0025 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化) PC-12
hz0026 大鼠肾细胞 NRK
hz0027 大鼠肾细胞 NRK-52E
hz0028 大鼠嗜碱性细胞白血病细胞 RBL-2H3
hz0029 大鼠雪旺细胞 RSC96
hz0030 貂肺上皮细胞 Mv.1.Lu
hz0031 非洲绿猴SV40转化的肾细胞 COS-1
hz0032 非洲绿猴SV40转化的肾细胞 COS-7
hz0033 非洲绿猴肾细胞 CV-1 [Part of the Wistar Special Collection]
hz0034 非洲绿猴肾细胞 Vero
hz0035 非洲绿猴肾细胞 VERO C1008 (E6)
0.25%温*消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。
4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按2:1新旧混合)。
5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。
6.按一分为二比例接种培养。
使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法:
1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞,90%汇合时制成细胞悬液,再按105细胞/毫升重新接种培养。
2.在细胞半汇合时,准备0.25μg/ml的丝裂霉素C,按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜;或用射线单次照射,剂量30~50戈瑞。
3.细胞经上述处理后,Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时,*消化细胞制成悬液,按5×104(104细胞/cm2)接种入新叠氮钠血琼脂基础中。
4.48小时后,即可用于细胞克隆之用。
叠氮钠血琼脂基础细胞分离(克隆)培养
多孔塑料培养板单细胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆细胞,吸出瓶内培养液,加消化液。
2.低密度细胞悬液的制备:做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液,然后稀释细胞,使之成为1~2细胞/毫升悬液,zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。
3.接种:先用吸管轻轻吹打细胞悬液,使混悬均匀,继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确,争取在zui短时间内加完,以免培养液蒸发,然后迅速盖好盖板,置CO2温箱培养。
4.标记:培养6~12小时后,待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后,从温箱中取出,置倒置光显微镜台上,观察和标记下含有单个细胞的孔,置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液,只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基,但不要吸除过多,余少许,以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液,继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时,可进行分离培养。
5.分离扩大培养:培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔,先吸除旧培养液,用Hanks洗1~2次,继加*少许,加入量已能覆盖细胞群即可,如过多,应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视,待发现细胞变圆时,加入0.1ml含10%血清的克隆培养基,用吸管轻轻吹打,当细胞离开底物悬浮后,一并吸入管内,移入另瓶或皿中,再补加一定量克隆培养液,置CO2温箱中继续培养、增殖,使之形成新的细胞群后,即转用常规培养法培养。
叠氮钠血琼脂基础相关产品如下:hz1039 乳糖蛋白胨培养液 250g 用于饮用水,水源水中总大肠菌群的测定
Lactose Peptone Broth
hz1042 亮绿琼脂 250g 用于饮用水,水源水中沙门氏菌选择性增菌
Brilliant Green Lactose Broth
hz1043 亮绿乳糖培养基 Brilliant Green Lactose Medium 250g 用于饮用天然矿泉水中大肠杆菌的检验(GB标准)
hz1083 亚硫酸铋琼脂 250g 用于饮用水,水源水中沙门氏菌的选择性培养
Bismuth Sulfite Agar
hz1044 品红亚*琼脂(远滕氏琼脂) 250g 用于饮用水、水源水中总大肠菌群的选择性分离和确证
Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar
hz1410 假单胞分离琼脂 250g 用于饮用水,水源水中假单胞菌群的测定
Pseudomonas Isolation Agar
hz1401 假单胞分离肉汤 250g 用于饮用水,水源水中假单胞菌群的测定
Pseudomonas IsolationBroth
hz1402 假单胞 F 琼脂 250g 用于饮用水,水源水中铜绿假单胞菌的测定
Pseudomonas F Agar
hz1403 假单胞 P 琼脂 250g 用于饮用水,水源水中铜绿假单胞菌的测定
Pseudomonas P Agar
hz1406 MFC培养基 250g 用于饮用水、水源水中粪大肠菌群滤膜法测定(GB标准)
MFC Medium
hz1407 气单胞菌鉴别琼脂 250g 用于分离培养和鉴别气单胞菌
Aeromonas Differential Agar
hz1028 橙血清培养基 Orange-serum agar 250g 用于食品及饮料中耐酸菌的检测


















