Todd-Hewitt 肉汤特殊培养法
二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为:
1.吸除旧培养液注入另瓶中。
2.用温BSS冲洗1次。
3.用0.25%温*消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。
4.待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按2:1新旧混合)。
5.轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。
6.按一分为二比例接种培养。
使用饲细胞(Feeder Cells)。制备方法:
1.取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞,90%汇合时制成细胞悬液,再按105细胞/毫升重新接种培养。
2.在细胞半汇合时,准备0.25μg/ml的丝裂霉素C,按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜;或用射线单次照射,剂量30~50戈瑞。
3.细胞经上述处理后,Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时,*消化细胞制成悬液,按5×104(104细胞/cm2)接种入新Todd-Hewitt 肉汤中。
4.48小时后,即可用于细胞克隆之用。
Todd-Hewitt 肉汤细胞分离(克隆)培养
多孔塑料培养板单细胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆细胞,吸出瓶内培养液,加消化液。
2.低密度细胞悬液的制备:做克隆细胞时首先需先用消化法制备出分散成单个细胞悬液,然后稀释细胞,使之成为1~2细胞/毫升悬液,zui适宜细胞密度为1~2细胞/ml培养液。
3.接种:先用吸管轻轻吹打细胞悬液,使混悬均匀,继用加样器向塑料培养板每孔内加0.5毫升。接种时要迅速准确,争取在zui短时间内加完,以免培养液蒸发,然后迅速盖好盖板,置CO2温箱培养。
4.标记:培养6~12小时后,待细胞下沉冰贴附于培养板孔底后,从温箱中取出,置倒置光显微镜台上,观察和标记下含有单个细胞的孔,置CO2温箱培养。在培养中一般无需换液,只有在细胞增长过于缓慢时才可进行换液。换液时先吸除旧培养基,但不要吸除过多,余少许,以免细胞干涸。然后再迅速补加新鲜克隆培养液,继续培养3~4周。待孔内细胞增至500~600个时,可进行分离培养。
5.分离扩大培养:培养86~96小时后进行观察。挑选生长良好的单细胞克隆孔,先吸除旧培养液,用Hanks洗1~2次,继加*少许,加入量已能覆盖细胞群即可,如过多,应吸除多余消化液。置于倒置显微镜下窥视,待发现细胞变圆时,加入0.1ml含10%血清的克隆培养基,用吸管轻轻吹打,当细胞离开底物悬浮后,一并吸入管内,移入另瓶或皿中,再补加一定量克隆培养液,置CO2温箱中继续培养、增殖,使之形成新的细胞群后,即转用常规培养法培养。
Todd-Hewitt 肉汤相关产品如下:hz1124 沙氏琼脂培养基 250g 用于真菌检测(GB标准)
Sabourauds Agar
hz1125 沙氏液体培养基 250g 用于真菌、酵母菌增菌
Liquid Sabouraud Medium
hz1126 产毒培养基 250g 用于青霉,曲霉的产毒培养
Toxin-Producing Medium
hz1127 玉米粉琼脂 250g 用于真菌培养
Corn Meat Medium
hz1128 虎红琼脂培养基(孟加拉红) 250g 用于食品中霉菌及酵母菌总数测定
Rose Bengal Medium
hz1129 麦芽浸粉琼脂(MEA) 250g 用于霉菌和酵母菌的分离、计数和培养
Malt Extract Agar
hz1130 麦芽浸粉肉汤(MEB) 250g 用于霉菌和酵母菌的培养
Malt Extract Broth
hz1131 沙氏BHI琼脂 250g 用于真菌检测(GB标准)
Sabouraud BHI Agar
hz1132 曲霉菌琼脂基础 250g 用于黄曲霉菌的检测
Aspergillus Agar Base
hz1133 酵母膏、麦芽膏琼脂 250g 用于*链霉菌检测
Yeast Extract-Medium Extract Agar
乳酸菌、双歧杆菌检测培养基
hz1135 改良番茄汁培养基基础 250g 用于食品中乳酸菌总数测定(使用时需另加番茄汁)
Tomato Juice Agar, Modified
hz1136 改良MC培养基 250g 用于食品中乳酸菌总数测定
Chalmers Agar ,Modified
hz1137 MRS肉汤(MRS) 250g 用于食品中乳酸菌测定
MRS Broth
hz1138 MRS琼脂(MRSA) 250g 用于乳酸菌的分离、计数和培养
MRS Agar
hz1139 BBL琼脂培养基 250g 用于食品中双歧杆菌分离培养
BBL Agar Medium