基础改良Frey 氏培养基基础
绝大多数培养基是建立在*(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。zui广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。MEM/F12 这两种培养基各取1/2,形成神经生物学zui通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。选择某种培养基,应仔细了解成分表,应知道大多数情形下培养基都有不足。例如,有些培养基在氨基酸中包括有*,而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域,但它对某些对*敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言,则并非*选择,特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有*,据报道也有神经毒效应。
改良Frey 氏培养基基础制备方法:
1. 培养同源细胞(未克隆前时的同一细胞)至半汇合状态时,更换一次培养液,再继续培养24~48小时后,吸出所有培养液。
2. 离心:3000~4000/分离心10分钟,吸取上清液。
3. 滤过:再经直径0.22μm滤孔的滤膜过滤,低温冻存贮备用;用时取1分适应培养基+2培养基混合使用。
生长因子绝大多数哺乳类胚胎神经元有严格的营养要求,若不能提供适宜的生长因子或合适的因子组分,将会使绝大多数神经元在体外培养的数天中死亡。解决这一问题有两条思路,一是让培养细胞提供自己的营养因子,二是在改良Frey 氏培养基基础中加入纯的生长因子。如果细胞混合物能在高密度时生长,所需的生长因子便会积累到可观的数值,尤其当培养基很少变化时。若某种细胞混合物生长时有很少的营养需求,可保持培养基在一段时间里不作任何变动,以使营养(生长)因子积累,而zui后促使所需要的细胞类型能够生长。但是,这种对营养(生长)因子自身倚赖性亦有弊端,因为通常在混合细胞群体中细胞很难有同比例增殖,某些细胞会因生长条件的贫乏而受限制。另外,这种方法只能进行相当高密度的细胞培养。因为培养基的条件在细胞的较低密度时变的不够有效。不过某些时候纯化神经元群体的低密度培养可用条件培养基(经过了高密度培养)进行,或在胶质上生长的神经元所用过的培养基来支持。
满足神经元营养需求的第二条途径是向培养基中加入生长因子。通常用于组培的通用适宜因子是神经生长因子NGF。不过,只有少数对这种蛋白质有反应的细胞类型的细胞才能生长。
改良Frey 氏培养基基础相关产品如下:hz0297 稳定转染了neor和LIF基因的STO细胞株 SNL细胞
hz0298 稳定表达EBNA1的人胚肾细胞,293E细胞
hz0299 蚊子细胞,C6/36细胞
hz0300 胃腺癌细胞(低分化)
hz0301 胃腺癌细胞,SGC-7901细胞
hz0302 胃腺癌细胞,AGS细胞
hz0303 胃癌细胞,MKN-74细胞
hz0304 胃癌细胞,MKN28细胞
hz0305 胃癌细胞,MGC80-3细胞
hz0306 胃癌细胞,MFC细胞
hz0310 团头鲂尾鳍细胞,WCF细胞
hz0311 兔子垂体细胞
hz0312 兔主动脉平滑肌细胞,SMC细胞
hz0313 兔主动脉平滑肌细胞,CCC-SMC-2细胞
hz0314 兔眼Tenon's囊成纤维细胞,RYTF细胞
hz0315 兔肾细胞系 RK-13细胞
hz0316 兔晶体上皮细胞永生系 N/N1003A(RLE)细胞
hz0317 兔角膜前基质层成纤维细胞,RCFBF细胞
hz0318 兔肝癌细胞,VX2细胞,
hz0319 兔成骨C IF细胞
hz0330 糖化酵母
hz0331 胎盘绒毛癌细胞,JAR细胞
hz0332 胎儿骨髓间充质细胞,FBM细胞
hz0340 鼠杂交骨髓瘤细胞,K6H6/B5细胞
hz0341 鼠胸腺激酶缺陷细胞株 L-MTK细胞
hz0342 鼠小脑细胞,C8-D1A细胞
hz0343 鼠纤维肉瘤细胞系 WEHI 164细胞
hz0344 鼠细胞系 B82细胞
hz0345 鼠伤*


















