培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
产品参数：
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 |
c-Raf抑制剂（ZM 336372） | ZM 336372 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg | BJ-01X8104 |
商品详细介绍：
ZM336372是c-Raf抑制剂，IC50为70nM，比对B-RAF的抑制性高10倍，对PKA/B/C，AMPK和p70S6无活性。 注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！ ：208260-29-1 纯度：96.79% 分子量：389.45 储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
人 HLA-DPB1 基因全长ORF克隆人钠离子通道蛋白抗体免疫试剂盒现货供应
人 HLA-DQB1 基因全长ORF克隆人内质网蛋白29(ERP29/C12orf8/ERP28)免疫试剂盒*直销
人 NIPSNAP3A 基因全长ORF克隆人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)免疫试剂盒进口、组装
人 PROCR 基因全长ORF克隆人内脏脂肪特异性丝蛋白抑制剂(vaspin)免疫试剂盒进口、分装
人 ELSPBP1 基因全长ORF克隆人内源性糖皮质激素(GC)免疫试剂盒现货供应
人 SOCS1 基因全长ORF克隆人内源性分泌型糖基化终产物受体(esRAGE)免疫试剂盒*直销
人 PCDH18 基因全长ORF克隆人内皮脂肪(EL)免疫试剂盒进口、组装
人 UGT1A5 基因全长ORF克隆人内皮抑素(ES)免疫试剂盒进口、分装
人 UGT1A4 基因全长ORF克隆人内皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫试剂盒现货供应
人 UGT1A3 基因全长ORF克隆人内皮细胞特异分子-1(ESM-1)免疫试剂盒*直销
人 UGT1A1 基因全长ORF克隆人内皮素2(EDN2)免疫试剂盒进口、组装
c-Raf抑制剂（ZM 336372）PIKfyve抑制剂(APY0201) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg APY0201500mL Tricine Buffered Saline,5X,pH7.0 Tricine Buffered Saline,5X,pH7.0 常温保存
IL-12/IL-23抑制剂(Apilimod) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg Apilimod10mL E-64蛋白抑制剂，20mg/mL E-64 Proteinase Inhibitor Solution -20℃保存
组胺释放抑制剂（Nylidrin hydrochloride） 1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg Nylidrin hydrochloride2 ug pTet-Off pTet-Off 低温运输，-20℃保存
DP1和EP2激动剂 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg Treprostinil sodium250mL 非冻型血液DNA保存液 Blood DNALOCKER 室温
PDE4抑制剂(ML-030) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg ML-0302 ug pDsRed-ER pDsRed-ER 低温运输，-20℃保存
COX-LOX双重抑制剂（Chebulagic acid） 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg Chebulagic acidSC琼脂基础 Sulfite Cycloserine Agar Base 250g
cannabinoid receptor2激活剂（GW842166X） 2mg|5mg GW842166X10g L- L-Serine 室温干燥保存
IRAK4抑制剂（IRAK4-IN-1） 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg IRAK4-IN-1WLD培养基 WLD Medium 250g
IRF3激动剂(KIN1148) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg KIN1148200 mL 大鼠中性粒细胞分离液1.091 Cell Separation Solution -20℃保存
P-glycoproteinand CYP3A4抑制剂(Piperine) 1mL(10mM)|200mg|1g|5g Piperine500mL HCl Buffer,1.0M,pH6.5 HCl Buffer,1.0M,pH6.5 常温保存
S1P受体激动剂(S1p receptor agonist 1) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg S1p receptor agonist 11.5mL 海藻糖溶液， 1.5M，PCR级 Trehalose Solution，PCR Grade 4℃保存
