肝素结合生长因子/酸性成纤维细胞生长因子抗体 动物体内单抗的方法迄今为止,通常情况下均采用动物体内单抗的方法,鉴于绝大多数动物用杂交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞与同品系的脾细胞融合而得,因此使用的动物当然*BALB/c小鼠。本方法即将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内,在小鼠腹腔内生长杂交瘤,并产生腹水,因而可得到大量的腹水单抗且抗体浓度很高。可见该法操作简便、经济,不过,腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白(包括Ig),因此在很多情况下要提纯后才能使用,而且还有污染动物病毒的危险,故而用SPF级小鼠。肝素结合生长因子/酸性成纤维细胞生长因子抗体 A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液体石蜡。c. 处于对数生*的杂交瘤细胞。
B、方法:a. 腹腔接种降植烷或液体石蜡,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接种用PBS或无血清培养基稀释的杂交瘤细胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 间隔5天后,每天观察小鼠腹水产生情况,如腹部明显膨大,以手触摸时,皮肤有紧张感,即可用16号针头采集腹水,一般可连续采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 将腹水离心(2000r/min 5分钟),除去细胞成分和其他的沉淀物,收集上清,测定抗体效价,分装,-70℃冻存备用,或冻干保存。
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Chicken Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ 鸡抗*Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)
Chicken Heat Shock Protein 20,HSP-20 鸡热休克蛋白20(HSP-20)
Chicken Heat Shock Protein 60,HSP-60 鸡热休克蛋白60(Hsp-60)
Hydroxycorticosteroids,17-OHCS 鸡17羟皮质类固醇(17-OHCS)
Chicken Interleukin 4,IL-4 鸡白介素4(IL-4)
Chicken Interleukin 2,IL-2 鸡白介素2(IL-2)
Chicken nitric oxide,NO 鸡一氧化氮(NO)
Chicken Herpes simplexvirus Ⅱ antibody,HSVⅡ-Ab 鸡单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体(HSVⅡ-Ab)
Chicken Complement 3 split product,C3SP 鸡补体3裂解产物(C3SP)
Chicken adrenomedullin,ADM 鸡肾上腺髓质素(ADM)
Chicken Alternative macrophage activation-associated CC chemokine 1,AmAC-1 鸡巨噬细胞替代激活相关化学因子1(AmAC-1)
Chicken Immune RNA,Irna 鸡免疫核糖核酸(Irna)
Chicken β-lactamase 鸡β内酰胺酶(β-lactamase)
Chicken Japanese Encephalitis IgG,JE IgG 鸡流行性乙型脑炎抗体IgG(JE IgG)
Chicken α-Glucosidase,a-Glu 鸡α葡萄糖苷酶(a-Glu)
Chicken Plaet Factor 4,PF-4 鸡血小板因子4(PF-4/CXCL4)
Chicken tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,TRAIL-R3 鸡肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)
Chicken L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL 鸡L苯*解氨酶(PAL)
Chicken nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH 鸡*腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)
(2) 体外培养单抗的方法总体上讲,杂交瘤细胞系并不是严格的贴壁依赖细胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以进行单层细胞培养,又可以进行悬浮培养。杂交瘤细胞的单层细胞培养法是各个实验室zui常用的手段,即将杂交瘤细胞加入培养瓶中,以含10-15%小牛血清的培养基培养,细胞浓度以1×106-2×106/ml为佳,然后收集培养上清,其中单抗含量约10-50ug/ml。显然,这种方法制备的单抗量极为有限,无疑是不适用于单抗的大规模。要想在体外大量制备单抗,就必须进行杂交瘤细胞的大量(高密度)培养。单位体积内细胞数量越多,细胞存活时间越长,单抗的浓度就越高,产量就越大。