大肠杆菌化学感受态细胞表达分析

SURE2 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats正向重复片段；Retroviral sequences 逆转录病毒序列；Stratagene;

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产品组分：

菌株描述

SURE2菌株是Agilent (Stratagene) SURE菌株的高效衍生菌，特别设计用于克隆在传统的大肠杆菌中 “无法克隆”的某些DNA片段。SURE菌株破坏了重组酶系统整条通路上的组分，这些组分能催化重组和删除体内的非标准二级和三级结构，包括十字形（由反向重复序列引起）和Z字形的DNA，经常出现在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆进入传统大肠杆菌菌株中。SURE2菌株含限制缺陷（McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-），使其无法对外源DNA进行标记和限制，从而提高外源甲基化DNA的克隆效率。

也含内切酶缺陷（endA），和重组缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的稳定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15使菌株适用于蓝白斑。SURE2菌株本身含卡那mei素、四环素和氯mei素特性。

SURE2菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr].

产品描述

本品是SURE2菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上融化感受态细胞。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低最终用于涂板的菌量。

5） 菌株本身含卡那emi素、四环素和氯emi素特性，携带此三种抗性的质粒不适合克隆到SURE2细胞。SURE2菌株能耐受＜40μg/ml氯mei素，但对100μg/ml 氯mei素很敏感。

6） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到zui低。

7） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。

8） 要想获得大量高纯度质粒，建议在TB培养基中摇菌培养（以pUC19为例，在TB培养液中过夜培养的菌体浓度和质粒产率是LB培养液的3~4倍，S.O.C培养液的~2倍）。

9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常规操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃取出感受态细胞，迅速插入冰中5min待其融化。

2） 向融化的感受态细胞中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25min。

3） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

4） 向每个离心管中加入700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5） 5000rpm离心1min，留取100μl左右轻轻吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养。

【注意】：a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可将所有转化产物涂布平板。b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少， 

附表1固体和液体LB培养基配方

附表2固体和液体2-YT培养基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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